反相高效液相色谱法测定制首乌及其4种中成药中大黄素含量

(华西医科大学药学院　成都　610041)

　　摘要　　将制首乌及其4种中成药在酸性条件下水解，提取，然后以C₁₈为固定相，甲醇—0.2 mol/L磷酸二氢钠溶液(80∶20，磷酸调节pH 3.0)为流动相，289 nm为检测波长，测定其中大黄素含量，建立了测定制首乌及其中成药中大黄素总量的反相高效液相色谱法。同时对样品的水解及提取条件进行了详细考察。在所拟条件下，大黄素线性范围为32.8～410 ng，平均加样回收率为97.83 %。
关键词：大黄素　制首乌　反相高效液相色谱法　中成药
何首乌为蓼科植物何首乌(P.multiflorum Thunb.)的干燥块根，是许多中成药处方的重要组分。它的主要成分为蒽醌类化合物^［1］，其中大黄素是其主要成分之一。关于何首乌中蒽醌类成分的测定已有一些报道^［2～5］，但许多处方中含何首乌的中成药尚无何首乌中蒽醌类成分的含量测定方法，因此我们采用RP—HPLC法建立了制首乌及其中成药中大黄素的含量测定方法，并对样品的水解及提取条件进行了详细研究，本文对含何首乌的中成药的质量控制有一定实际意义。
1　仪器与试药
日本岛津LC—6A高效液相色谱仪；SPD—6AV紫外检测器；C—R4A数据处理机；CTO—6A柱温箱。
大黄素对照品由中国药品生物制品检定所提供；制首乌、异功化瘤颗粒剂、首乌片、养血生脉胶囊、精乌冲剂均为市售品。
其它试剂均为分析纯。
2　色谱条件
分析柱：Shimpack CLC-ODS(150 mm×60 mm，5 μm)；保护柱：自填国产YWG C₁₈(10 mm×4.6 mm，10 μm)；流动相：甲醇—0.2 mol/L磷酸二氢钠溶液(80∶20，磷酸调节pH 3.0)；流速1 mL/min；检测波长289 nm；记录灵敏度AUFS＝0.16；柱温40 ℃；进样体积10 μL。在此色谱条件下，大黄素色谱峰峰形对称，供试品色谱图中大黄素峰能与其它成分很好分离，缺制首乌的异功化瘤颗粒剂在大黄素峰处无任何干扰，何首乌中含有的其它蒽醌类成分大黄酸、大黄酚及大黄素甲醚与之完全分离。制首乌及其4种中成药的色谱图见图1。

图1　制首乌及其中成药中大黄素色谱图
a.大黄素对照品　b.混合对照品　c.制首乌
d.异功化瘤颗粒剂　e.缺制首乌的异功化瘤颗粒剂
f.精乌冲剂　g.养血生发胶囊　h.首乌片
1.大黄素　2.大黄酸　3.大黄酚　4.大黄素甲醚

3　供试品溶液制备
取样品粉末适量(制首乌约0.2 g；异功化瘤颗粒剂约1 g；精乌冲剂约1 g；养血生发胶囊内容物约0.2 g；首乌片约0.5 g)，精密称定，置50 mL圆底烧瓶中，加水5 mL，盐酸0.5 mL，沸水浴回流30 min，冷却。水解液用乙醚萃取2次，每次15 mL。合并乙醚层，室温挥干，残留物用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
4　方法可行性研究
4.1　标准曲线及线性范围　精密称取大黄素对照品适量，用甲醇溶解，制成含大黄素约0.1 mg/mL的对照品贮备液。分别吸取该溶液0.4、0.8、1.0、2.5、5.0 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液各10 μL，注入液相色谱仪，各浓度溶液分别测定3次，以峰面积对进样量(ng)进行线性回归，得回归方程为：
Y＝3606+1.27×10⁶X　r＝0.9998
可见进样量在32.8～410 ng范围内，线性关系良好。
4.2　样品水解及提取条件考察　参考文献^［2］，对样品的水解及提取方法进行了详细研究。结果发现，照供试品溶液制备项下的方法，测得样品中大黄素含量最高且稳定，故选择上述条件作为供试品溶液的制备方法。
4.3　加样回收试验　精密称取一定量已知大黄素含量的异功化瘤颗粒剂粉末，加入大黄素对照品适量，按供试品溶液制备方法制备并进行测定，每份平行测定3次，共测9份样品，计算加样回收率为97.83 %，RSD为0.94 %。
4.4　方法精密度试验　在同一天内5个不同时间对同一供试品溶液及5个不同日期对同一批异功化瘤颗粒剂进行测定，分别计算，日内精密度为RSD＝0.44 %，日间精密度为RSD＝1.6 %。
5　测定结果
按所拟方法，对制首乌及其4种中成药异功化瘤颗粒剂、精乌冲剂、养血生发胶囊、首乌片中大黄素的含量进行测定，结果分别为1.34、0.092、0.038、0.0372、0.679 mg/g，n=3。
6　讨论
6.1　据文献^［1］报道，何首乌中含较多的蒽醌类成分，其中大黄素含量较高，为主要成分之一。大黄素一般以游离型和结合型2种形式存在。而中成药在生产过程中往往会造成部分结合型大黄素解离，因此测定中成药水解后的大黄素总量作为质量控制指标较为合理。
6.2　我们还曾对大黄素对照品溶液的稳定性进行了考察，结果表明：在4 ℃冰箱中保存，半个月之内，其浓度基本保持不变。
6.3　由于条件所限，尚未对除异功化瘤颗粒剂外的其它几个中成药的空白样品(缺制首乌)进行研究。但本文对这些中成药的质量控制仍具有参考价值。

参考文献
1　　阴　健等.中药现代研究与临床应用.北京：学苑出版社，1993.369
2　　姚桂根等.何首乌的质量研究—Ⅲ.高效液相色谱法测定何首乌及其片剂中的蒽醌类成分.中成药研究,1984,3:8
3　　大岛俊幸等.高效液相色谱法测定何首乌和夜交藤中蒽醌类成分的含量.药物分析杂志，1996，16(4)：219
4　　卢　红等.系数倍率法测定康宁糖浆中游离蒽醌的含量.中成药,1996,19(3):148
5　　吴振洁等.反相高效液相色谱法测定首乌喘息灵胶囊中大黄素的含量.中国药科大学学报,1997,28(2):123

(本文于1997年12月29日收到)

RP-HPLC Determination of Emodin in Radix Polygoni Multiflori
Preparata and Four Kinds of Related Chinese Patent Medicines

Liu Sankang,Qian Guangsheng and Li Zhangwan
(School of Pharmacy,West China University of Medical Sciences,Chengdu,610041)

　　Abstract:A RP-HPLC method has been developed to determine the emodin in Radix Polygoni Multiflori Preparata and four kinds of related Chinese patent medicines containing Radix Polygoni Multiflori Preparata,using a Shimpack CLC-ODS column with a mobile phase of methanol-0.2 mol/L NaH₂PO₄(80∶20，adjust to pH 3.0 with H₃PO₄)at a flow rate of 1 mL/min and a UV detector at 289 nm.After hydrolysized in acidic medium,the total emodin of the samples are extracted from the hydrolysates with ether and determined by the RP-HPLC method.The linear range of emodin is 32.8～410 ng,the mean recovery is 97.83 %.
　　Key words:emodin,Radix Polygoni Multiflori Preparata,RP-HPLC,Chinese patent medicines