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高效液相色谱法测定消炎利胆胶囊中脱水穿心莲内酯的含量

来源:中国色谱网
摘要:摘要:目的:建立高效液相色谱法分离和测定消炎利胆胶囊中脱水穿心莲内酯。结果:脱水穿心莲内酯峰与其他组分峰的分离度为1,理论塔板数以脱水穿心莲内酯峰计算为4600。关键词:脱水穿心莲内酯消炎利胆胶囊高效液相色谱法DeterminationofDehydroandrographolideinXiaoyanlidanCapsule......

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摘 要:目的:建立高效液相色谱法分离和测定消炎利胆胶囊中脱水穿心莲内酯。
方法:
采用Shim-Pack CLC-ODS C18柱,以0.01 mol.L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH至2.5)-甲醇-四氢呋喃(275∶200∶40)为流动相,检测波长250 nm。
结果:
脱水穿心莲内酯峰与其他组分峰的分离度为1,理论塔板数以脱水穿心莲内酯峰计算为4 600;线性范围0.4~2.0 μg,r=0.999 8,平均回收率为98.6%,RSD=2.03%。
结论:
本法准确、简便、快速,适用于该制剂的质量分析检验
关键词:脱水穿心莲内酯 消炎利胆胶囊 高效液相色谱法

Determination of Dehydroandrographolide
in Xiaoyanlidan Capsules by HPLC

Wang Yonglin Tao Ling Zhou Baozhu Li Yongjun
Department of Pharmacy,Guiyang Medical College, Guiyang 550004

AbstractObjectiveTo develop a HPLC method for the separation and determination of dehydroandrographolide in Xiaoyanlidan capsules.Methods:Dehydroandrographolide was separated on Shim-Pack CLC-ODS C18 column (5 μm, 150 mm×6 mm) and detected at 250nm, by using 0.01 mol.L-1 K2 HPO4-MeOH-THF(27520040)as mobile phase. Results:The resolution was 1. The number of theoretical plates calculated for dehydroandrographolide peak was 4 600; the standard curve was linear in the concentration range of 0.42.0 μgr=0.999 8. The average recovery was 99.2%(RSD=2.50%).Conclusion:This method is accurate, rapid, and simple for quantitative analysis of Xiaoyanlidan capsules.
Key wordsdehydroandrographolide, Xiaoyanlidan capsules, HPLC

  消炎利胆胶囊系由穿心莲、苦木、溪黄草3味中药经提取加工制成的胶囊剂,具清热、祛湿、利胆的功效。临床用于肝胆湿热引起的口苦,胁痛和急性胆囊炎、胆管炎。穿心莲为本方的主药,为保证消炎利胆胶囊的临床疗效,有必要控制穿心莲药材的质量。曾有文献报道用高效液相色谱法[1]和薄层扫描法[2]测定与本品处方相同的莲胆消炎片中穿心莲内酯的含量,但制剂中脱水穿心莲内酯的含量测定方法未见报道。本试验研究了高效液相色谱法测定消炎利胆胶囊及药材中脱水穿心莲内酯含量测定方法。并对药材中脱水穿心莲内酯的含量测定与1995年版药典收载的薄层扫描法进行了比较。结果表明,该法操作简便、快速、重现性好,可用于消炎利胆胶囊的质量控制。

1 仪器与试药

  岛津LC-6A高效液相色谱仪,SPD-6AV紫外-可见分光光度检测器,C-R6A色谱数据处理机。四氢呋喃(色谱纯)、磷酸二氢钾(分析纯)、脱水穿心莲内酯对照品(中国药品生物制品检定所提供)。

2 色谱条件

  Shim-Pack CLC-ODS色谱柱(5 μm,150 mm×6 mm);流动相:0.01 mol.L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH至2.5)-甲醇-四氢呋喃(275∶200∶40),流速1 mL.min-1;柱温:35 ℃;检测波长250 nm;检测灵敏度:0.08 AUFS。

3 溶液配制

3.1 对照品溶液的配制 精密称取对照品20 mg,置100 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
3.2 供试品溶液的制备 取本品10粒的内容物,混匀,取约0.1 g,精密称定,置25 mL量瓶中,精密加入甲醇10 mL,密塞,冷浸30 min,超声处理10 min,摇匀,取上清液用0.45 μm微孔滤膜滤过,滤液作为供试品溶液。同法制备不含穿心莲的阴性样品溶液。

4 方法与结果

4.1 系统适用性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试液10 μL注入色谱仪,记录色谱图(图1)。理论塔板数以脱水穿心莲内酯峰计算为4 600,脱水穿心莲内酯峰与其他组分峰的分离度为1,脱水穿心莲内酯峰保留时间约14 min,阴性样品图谱在脱水穿心莲内酯峰位置处无假阳性峰,即本试验条件下脱水穿心莲内酯峰与其他组分分离完全。


图1 色谱图
A. 对照品  B. 供试品  C. 阴性样品
1. 脱水穿心莲内酯

4.2 线性关系考察 精密吸取脱水穿心莲内酯对照品溶液2,4,6,8,10 μL进样,记录色谱图,以峰面积A对质量W(μg)进行线性回归,回归方程为:
W=5.961×10
-6A-8.417×10-4 r=0.9998
拟合成过原点的方程为:
W=5.924×10
-6A
将一供试品溶液进样分析所得峰面积分别代入2方程计算,结果的相对偏差为0.06%,由此可看出截距近似为零,故采用外标一点法计算含量。线性范围0.4~2.0 μg。
4.3 精密度试验 取一供试品按供试品溶液的制备方法制备供试液,重复进样5次,RSD为0.7%。
4.4 重现性试验 取一供试品按供试品溶液的制备方法制备5份供试液,分别进样,RSD为1.17%。
4.5 回收率试验 精密称取已测知含量的同一样品5份,分别精密加入脱水穿心莲内酯对照品的甲醇溶液(0.096 mg.mL-1)10 mL,密塞,冷浸30 min,以下按供试品溶液的制备方法制备供试液,进样,记录色谱图,计算回收率。平均回收率为98.6%,RSD为2.03%(n=5)。
4.6 样品测定 按项3下方法制备供试液及对照品溶液,分别进样,记录色谱图,测定峰面积。测定了3个批号消炎利胆胶囊样品和2个批号消炎利胆片中脱水穿心莲内酯含量,测定结果见表1。

表1 样品含量测定结果(n=3)

样品

批号

含量/g.g-1

RSD/%

消炎利胆胶囊

980325

2.47

0.47

980328

2.42

0.82

980406

2.59

0.33

消炎利胆片

971212

0.82

0.84

980530

0.91

1.37


5 讨论

5.1 穿心莲主要含穿心莲内酯(Andrographolide)、脱水穿心莲内酯(14-Deoxy-11,12-didehydro-andrographolide)、新穿心莲内酯(Neoandrographolide)等成分[3]。试验中我们收集了不同产地的穿心莲药材,并对药材中脱水穿心莲内酯的含量测定方法进行了研究,除超声时间增加为60 min外,测定方法与制剂测定方法相同。用本法测定的5批药材的结果与1995年版中国药典收载的薄层扫描法测定结果进行比较(见表2),结果表明,2种方法测定的结果差异不大。而不同批号药材的测定结果差异较大,鉴于大生产中的原料受产地、来源、品种等因素的影响,使制剂测定结果产生较大的差异,故对穿心莲药材中脱水穿心莲内酯的含量应作限度规定。

表2 穿心莲药材含量测定结果(%,n=3)

药材编号

高效液相色谱法

薄层扫描法

1

0.916

0.923

2

0.770

0.781

3

0.465

0.448

4

0.453

0.451

5

0.937

0.923


5.2 
流动相的选择 试验中曾以甲醇-水、乙腈-水和四氢呋喃-水等流动相进行试验,阴性样品在脱水穿心莲内酯峰位置处有假阳性峰,虽经调整流动相比例以及加入适量酸或盐调整,但脱水穿心莲内酯峰与假阳性峰始终未能很好分离,干扰测定。经比较,选定0.01 mol.L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH至2.5)-甲醇-四氢呋喃(275∶200∶40)作为最佳流动相配比,其中四氢呋喃的比例对脱水穿心莲内酯保留时间及分离程度影响较大,四氢呋喃比例增加保留时间延长。
5.3 
温度的影响 试验中考察了不同温度(t=25~40 ℃、△t=5 ℃)对试验结果的影响,试验结果表明,温度在35 ℃时脱水穿心莲内酯峰与相邻杂质峰的分离度最大,随温度的降低脱水穿心莲内酯峰分离度降低,保留时间延长。
5.4 样品超声时间及稳定性试验考察 试验中对样品超声时间进行了考察,试验结果表明样品超声处理10 min即可将样品中的脱水穿心莲内酯提取完全。样品溶液在室温下(25 ℃)放置,每隔1 h测定1次,5次测定结果的RSD为1.87%。说明样品液中脱水穿心莲内酯的含量测定在5 h内稳定。
5.5 提取条件的选择 选择不同浓度的乙醇、甲醇,在超声波浴中超声(功率125 W)处理,结果基本相同。但乙醇提取的供试液在色谱分离中柱效不如甲醇提取液好,杂质含量高,故采用甲醇作溶剂超声处理提取分离样品中脱水穿心莲内酯,具有操作简便、提取率高、杂质少等优点。含量测定方法的回收率、精密度高,重现性好。■

作者单位:王永林(贵阳医学院药学系 贵阳 550004)
陶玲(贵阳医学院药学系 贵阳 550004)
周宝珠(贵阳医学院药学系 贵阳 550004)
李勇军(贵阳医学院药学系 贵阳 550004)

参考文献

[1]郭世民. RP-HPLC法测定消炎利胆片中穿心莲内酯的含量.湖南中医药导报, 1997,3 (4):42
[2]王泽芳,傅小英,赵英等. 薄层扫描法测定消炎利胆片中穿心莲内酯的含量. 中成药, 1997, 19(7):15
[3]阴健,郭力弓. 中药现代研究与临床应用(1).北京:学苑出版社,1994.518

收稿日期:1998-12-15

作者: 王永林陶玲周宝珠李勇军 2007-5-18
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