穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元的高效液相色谱法测定

摘　要：目的：用正相高效液相色谱法测定薯蓣皂苷元，可使测定波长至206 nm而不受流动相干扰。方法：采用Shim-pack CLC-Sil色谱柱(150 mm×6.0 mm)，石油醚-异丙醇(98∶2)为流动相，检测波长206 nm。
结果：该法能很好地分离薯蓣皂苷元和其相关杂质，测定的线性范围0.58～11.6 μg，r=0.999 8，检测限为0.05 μg，平均加样回收率为99.8%，精密度RSD为3.0%。
结论：本法测定样品无需衍生化，分离效果好，分析快速准确。
关键词：高效液相色谱法　穿龙薯蓣　薯蓣皂苷元

A Normal-phase High Performance Liquid Chromatographic Method 
for the Determination of Diosgenin in Dioscorea nipponica Makino

Zhao Jingchan　Guo Zhi′an
（Department of Chemistry, Northwest University, Xi′an　710069）
Cheng Xiaofei　Xu Kai
（Company of Mei De Hua Lin, Xi′an　710054）

Abstract：Objective：A normal-phase high performance liquid chromatographic method for the determination of diosgenin in the roots of Dioscorea nipponica Makino was established.Method: The condition of HPLC was Shim-pack CLC-Sil column (150 mm×6.0 mm)，mobile phase of 2.0% isopropand in petroleum ether and UV detector at 206 nm.Results: The calibration curve was linear in the range of 0.58～11 μg of diosgenin with correlation coefficient of 0.999 8, the limit of determination is 0.05 μg, the precision (RSD) and average recovery were 3.6%(n=5) and 99.8% (n=3) respectively. Conclusion:The method is not derivatived and the result of separation is good. The determination is accurate, convenient.
Key words：HPLC,Dioscorea nipponica Makino, diosgenin▲

　　薯蓣皂苷元是合成甾体类激素药物的重要原料，且具有止咳、祛痰、脱敏、恢复病变组织等作用。国内外对其分析方法有气相色谱法^［1，2］、分光光度法^［3］、反相色谱法^［4］、薄层定量法^［5］等，除色谱法外的其它测定法均受相关物质干扰，由于薯蓣皂苷元沸点高，气相色谱条件苛刻。薯蓣皂苷元的分子光谱仅在206 nm处有一中等强度的吸收峰，用反相色谱法，流动相在此波长吸收较强，测定的灵敏度低，线性差，要准确测定就必须进行衍生化处理。有人在衍生化后以80%的乙腈为流动相，进行测定分析，成本较高，手续繁琐，且衍生化反应也易引入误差。本文采用正相高效液相色谱法测定，用经过分子筛处理的石油醚加入少量异丙醇为流动相，样品无需衍生化处理，方法简单，分离效果好，灵敏度较高，分析成本低廉，适于各种分析测试。

1　仪器与试剂

　　岛津LC-6A高效液相色谱仪，紫外检测器，CR-3A数据处理机。
　　石油醚为分析纯，沸程60～90 ℃(经分子筛处理)；异丙醇为分析纯。薯蓣皂苷元对照品由美德华林公司提供，含量99.2%。

2　色谱条件

　　Shim-pack CLC-Sil色谱柱(150 mm×6.0 mm)，流动相：石油醚-异丙醇(98∶2)，检测波长：206 nm，流速：1.2 mL^.min^-1，灵敏度 0.08AUFS，柱温：室温。

3　溶液制备

3.1　对照品溶液　准确称取薯蓣皂苷元对照品，用少量异丙醇溶解，用流动相配制成浓度为0.580 mg^.mL^-1的对照品溶液。
3.2　样品溶液　准确称取处理过的穿龙薯蓣根粉50.0 g，放入1 000 mL圆底烧瓶中，加入1.0 mol^.L^-1硫酸水溶液300 mL，水浴加热回流8 h，用布氏漏斗过滤除去滤液，水洗滤渣至中性，取出滤渣，烘干，再投入原圆底烧瓶中，分别加入石油醚(60～90 ℃)100 mL，热提取3次，每次1 h，提取液趁热过滤，合并滤液，减压水浴蒸馏浓缩至干，制得待测试样品。准确称取此样品约7 mg，用流动相定容于20 mL容量瓶中，制得样品溶液。

4　结果与讨论

4.1　色谱分离　正相色谱一般应用5～7个碳原子的烷烃作流动相，其分子既无双键又无含孤电子对的原子，紫外区无任何吸收，皂苷元有一定的极性，且在紫外206 nm处有吸收带，若流动相在此波长处透光率较高，样品便无需衍生化可直接测定。本文选用正相色谱法分离测定皂苷元，能满足上述要求，效果较好，流动相可选用正己烷。为降低分析费用，也可以使用石油醚。经实验，流动相为石油醚-异丙醇(98∶2)，流速1.2 mL^.min^-1时，可使薯蓣皂苷元与杂质完全分离，在206 nm处检测有足够的灵敏度。
4.2　定量分析　用微量注射器准确吸取对照品溶液1.0，4.0，8.0，12.0，16.0，20.0 μL进样，测得峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归处理，得回归方程：
Y=3.681×10⁷X+1700　r=0.999 8
　　线性范围和定量限为0.58～11.6 μg。音讯噪比为3时的检测限为0.05 μg，理论塔板数为5 000，皂苷元与最邻近峰分离度为2.8。
4.3　精密度的测定　准确称取同一批样品5份，按“3.2”项方法制备，进行分析，测得薯蓣皂苷元的含量为2.22%，RSD为3.0%。
4.4　回收试验　取已测得含量的穿龙薯蓣根粉3份，各5.00 g，每份加入薯蓣皂苷元约20 mg，研磨混匀，放入250 mL圆底烧瓶中，加入1.0 mol^.L^-1硫酸水溶液30 mL，水浴加热回流8 h，用布氏漏斗过滤除去滤液，用水将滤渣洗至中性，取出滤渣烘干，于250 mL圆底烧瓶中，每次用10 mL石油醚热提取3次，每次1 h，提取液趁热过滤，合并滤液，浓缩至约10 mL，转移到100 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度。在选定的色谱条件下，测得回收率平均值为99.8%，RSD为3.6%，n=3。
4.5　样品测定　用本方法测定了在陕西不同时间收购的穿龙中薯蓣皂苷元的含量，结果见表1，色谱图见图1。由实验结果可知，不同时间收购的穿龙薯蓣中，薯蓣皂苷元含量有一定的差异，可能与采收季节有关。

表1　样品测定结果(n=3)

样品号

含量/%

RSD/%

1

1.69

2.0

2

2.22

1.7

3

1.73

2.0

图1　样品色谱图
1.薯蓣皂苷元

5　结论

　　本实验采用正相高效液相色谱法，样品无需衍生化处理，流动相无毒，分离效果好，测定准确，可作为含薯蓣皂苷类植物的测定方法。■

作者单位：赵景婵（西北大学化学系　西安　710069）
　　　　　郭治安（西北大学化学系　西安　710069）
　　　　　成小飞（美德华林公司　西安　710054）
　　　　　徐凯（美德华林公司　西安　710054）

参考文献
［1］Cook B K. Determination of Diosgenin in Dioscorea deltoidea and dioscorea sylvatice by Gas-Liquid chromatography. Analyst, 1970,95(1):95
［2］陶莉，达晖宁，达世禄等.盾叶薯蓣中薯蓣皂甙元的气相色谱测定.中草药，1991，22(6)：252
［3］陈战国，耿征，刘谦光等.薯蓣皂甙元的分光光度法测定.分析化学，1996，24(2)：27
［4］达世禄，唐祥怡，达晖宁等.盾叶薯蓣中薯蓣皂甙元的反相高压液相色谱测定.色谱，1992，10(2)：98
［5］刘玉珍，钱本余，夏莉杰等.蒺藜中薯蓣皂甙元的双波长薄层扫描定量法.中成药，1992，14(10)：35

　收稿日期：1999-07-09