高效液相色谱法测定气滞胃痛冲剂中甘草次酸的含量

摘　要　应用高效液相色谱法测定气滞胃痛冲剂中甘草次酸的含量，回收率为(97.41±2.20)%，相关系数为0.999 7.

Quantitative Determination of Glycyrrhetinic Acid in “Qizhiweitong Granule” by HPLC

Zhang Guogang,Xu Suixu,Jin Fenghuan,Zhou Xuemei
Department of Traditional Chinese Medicines,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015

Abstract　Glycyrrhetinic acid in “Qizhiweitong Granule” was determined quantitatively by HPLC.The procedure was simple and rapid.The results were stable and reproducible.The average recovery was (97.41±2.20)%,and coefficient of correlation was 0.999 7.The results showed that this method is suitable for the quality control of “Qizhiweitong Granule”.
Key words　Qizhiweitong Granule;glycyrrhetinic acid;HPLC

气滞胃痛冲剂是由延胡索、甘草、白芍等6味中药组成，经提取、精制加工制成.具有疏肝解郁、理气止痛之功.临床上用于治疗胃痛、腹痛、肋痛等诸种痛证.甘草是气滞胃痛冲剂中主药之一，它是豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.),胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Bat.)或光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)的干燥根及根茎.具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药之功^〔1〕.其化学成分较复杂，含有三萜皂苷、黄酮、生物碱、多糖等多种成分，而其主要有效成分为甘草酸及其水解产物甘草次酸等三萜类化合物^〔2〕.药理试验表明：甘草酸及甘草次酸具有肾上腺皮质激素样作用，同时也具有抗溃疡、抗炎等作用^〔3〕.另外在实验中，我们发现甘草次酸在高效液相色谱柱分离后很容易和甘草中乃至样品中所含其它化学成分分开，其化学性质稳定，在250 nm紫外区有最大吸收，重现性较好.因此，我们选择甘草次酸作为指标成分，应用高效液相色谱法进行含量测定，以控制气滞胃痛冲剂的质量.

1　仪器与试药

　　高效液相色谱仪　美国Perkin Elmer公司1022-LC色谱工作站200泵LC295 UV～VIS检测器；试剂　甲醇、水(色谱纯，沈阳化学试剂厂).对照品　甘草次酸(中国药品生物制品鉴定所)；气滞胃痛冲剂：本溪第三制药厂(批号960901市售).

2　色谱条件

　　色谱柱：C₁₈柱(4.6 mm×25 cm,10 μL)(大连化学物理研究所)；流动相：甲醇∶水(90∶10)(水：用磷酸调至pH3.7)；检测波长：250 nm；流速：1 ml/min；纸速：3 mm/min；灵敏度：0.02 AUFS；RES：FAST；进样量：20 μL.

3　方法与结果

3.1　工作曲线的考察

图1　标准品甘草次酸的色谱图　　图2　样品的色谱图

精密称取甘草次酸标准品置于容量瓶中，以甲醇溶解稀释至刻度，配成0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mg/mL浓度的甘草次酸标准品溶液，分别进样20 μL，每个浓度重复4次，测量每个浓度的平均色谱峰峰面积积分值.经计算得到甘草次酸色谱峰面积积分值(A）与浓度(C)之间的回归方程式为：Y=6.809×10⁴+2.575×10⁷ X.经变换即为C=3.883×10^-8A-2.644×10^-3，相关系数r=0.999 7.线性回归曲线说明：在0.1～0.5 mg/mL浓度范围内甘草次酸浓度与色谱峰的峰面积积分值呈良好的线性关系.由于系统误差，标准曲线未过原点，所以，我们可采用外标两点法进行测定样品中甘草次酸的含量.
3.2　供试品溶液的制备
精密称取本品10 g，置碘量瓶中，加氯仿50 mL，盐酸0.5 mL，超声提取15 min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容于10 mL容量瓶中，作为供试品溶液.
3.3　样品的测定
精密吸取供试品溶液，进样量20 μL，按上述色谱条件，每个样品测定3次，取平均值，按工作曲线法计算出气滞胃痛冲剂中甘草次酸的含量.结果见表1，其色谱图见图1，图2.

表1　气滞胃痛冲剂中甘草次酸的含量测定

批号

测定次数

1

2

3

4

5

(c±s)／mg\5g^-1

960901　C_含/mg*g^-1

0.228 4

0.232 9

0.231 7

0.232 5

0.235 4

0.232 2±0.002 5

供试品中甘草次酸的计算公式：
C_含／mg*g^-1=标准曲线查得浓度或用线性回归方程计算出的浓度(mg/mL)×10 mL／10 g.
3.4　回收率测定
精密吸取气滞胃痛冲剂两份，其中一份按含量测定方法测定其中的甘草次酸的含量(C_样)，另一份定量地加入甘草次酸标准品1.90 mg,混匀，再次按含量测定方法测定其中的甘草次酸的含量(C_总)，并计算回收率，结果见表2.

表2　甘草次酸回收率的测定/批号：960901；样品：10 g；标准品：1.90 mg

1

2

3

4

5

2.284

2.329

2.317

2.325

2.354

4.153

4.136

4.122

4.204

4.248

R%

98.37

95.11

95.00

98.89

99.68

(r±s)%

97.41±2.20

　
3.5　精密度的测量
取气滞胃痛冲剂按含量测定项下方法测定其中的甘草次酸的含量，连续进样5次，每次20 μL，测定峰面积积分值，并计算甘草次酸的含量，结果见表3.

表3　气滞胃痛冲剂中甘草次酸精密度的测定　批号：960901；M_样：10 g

1

2

3

4

5

C_含／mg^.g^-1

0.228　9

0.228 8

0.221 4

0.261

0.234 0

(c_含±s)%/mg^.g^-1

0.227 8±0.004 6

作者单位：张国刚　徐绥绪　金凤环　沈阳药科大学中药系，沈阳　110015；
周雪梅　本溪第三制药厂，本溪　117019

参考文献

［1］　中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典：一部.广州：广东科技出版社.1995.71～72
［2］　阴健，郭力.中药现代研究与临床应用.北京：学苑出版社，1993.196～198
［3］　郑学忠.生药学.北京：人民卫生出版社，1986，93～94

　收稿日期:1998-06-26