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摘要 目的:建立同时测定杜仲中京尼平苷、京尼平苷酸及绿原酸的反相高效液相色谱法。方法:采用YWG-C18色谱柱(250 mm×4.6
mm,10 μm),以甲醇-水-冰乙酸(19∶81∶1.5)为流动相,检测波长240 nm。结果:京尼平苷酸、绿原酸及京尼平苷的加样回收率分别为90.8%~112.7%,102.8%~107.8%,91.6%~93.1%;精密度(RSD)分别为2.3%,1.7%,1.2%,n=5。结论:不同产地杜仲皮及叶中京尼平苷酸、绿原酸及京尼平苷的含量相差很大。 A RP-HPLC Method for the Determination of Geniposide,Geniposidic Acid and Chlorogenic Acid in Eucommia ulmoides Oliv. Qi Xiangyang Chen Weijun Zhang Shenghua Abstract:Objective:To establish
a new RP-HPLC method for simultaneous determination of geniposide(GP),geniposidic
acid(GA) and chlorogenic acid (CGA) in E.ulmoides Oliv.Method:GA,CGA and GP were analysed by
using C18 column
(250 mm×4.6 mm,10 μm)with detector at 240 nm,and the mobile phase consisting
of CH3OH-H2O-CH3COOH(19∶81∶1.5).Results:The recoveries of GA,CGA and GP
were 90.8%~112.7%,102.8%~107.8%,91.6%~93.1% and the precision(RSD)were 2.3%,1.7%,1.2%,n=5,respectively.Conclusion:Quantitative analysis showed that
there were considerable difference of the content of GA,CGA and
GP in the leaves and barks of E.ulmoides Oliv.from different growing
areas. 杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)系杜仲科杜仲属植物,为我国名贵药材。具有消炎抑菌、补肾降压、增强免疫功能及抗癌、抗疲劳、抗衰老等多种药理作用,其中,京尼平苷(geniposide,GP)、京尼平苷酸(geniposidic acid,GA)及绿原酸(chlorogenic acid,CGA)为杜仲中重要的生物活性成分[1,2]。而目前对杜仲中这3种生物活性成分定量分析报道甚少[3~5],作为杜仲的主产地,我国具有十分丰富的杜仲资源,为充分合理地开发利用杜仲资源,本文采用反相高效液相色谱法同时对杜仲皮、叶中京尼平苷、京尼平苷酸及绿原酸进行了定性、定量分析。方法简便、快速、准确,有助于杜仲产品的开发及质量评定。 1 仪器、样品与试剂 Shimadzu LC-6A高效液相色谱泵,SPD-6AV紫外检测器,C-R3A
Chromatopac自动积分仪;YWG-G18色谱柱(250 mm×4.6 mm,10 μm,中国科学院大连化学物理研究所)。 2 对照品溶液及样品溶液制备 2.1 对照品溶液的配制 准确称取各种对照品适量,用甲醇溶解后置于25
mL容量瓶,并稀释至刻度,配制成含京尼平苷酸0.099 mg.mL-1、绿原酸0.089 7 mg.mL-1、京尼平苷0.114 mg.mL-1的对照品混合溶液。 3 色谱条件 流动相:甲醇-水-冰乙酸(19∶81∶1.5);检测波长:240
nm;柱温:室温;流速:1 mL.min-1;紫外检测器:0.04
AUFS;进样量:5 μL。 4 方法与结果 4.1 检测波长的选择 京尼平苷酸、绿原酸及京尼平苷的对照品溶液的紫外分析结果表明,3种成分在240
nm左右均有较强的吸收,因此,选择240 nm为紫外检测波长。 |
图1 杜仲样品与对照品的HPLC分析图谱 4.3 线性关系 将配制的对照品混合溶液依次进样2,5,10,15,20
μL,按上述色谱条件进行分析,京尼平苷酸、绿原酸和京尼平苷的回归方程分别为: 表1 回收率测定结果(n=3) |
组分 | 添加量/mg | 平均回收率/% | RSD/% |
京尼平苷酸 | 0.0495 | 112.7 | 3.3 |
| 0.198 | 91.6 | 4.0 |
| 0.396 | 90.8 | 3.4 |
绿原酸 | 0.0449 | 102.8 | 1.9 |
| 0.179 | 107.8 | 2.6 |
| 0.359 | 103.3 | 0.7 |
京尼平苷 | 0.0570 | 91.6 | 1.6 |
| 0.228 | 93.1 | 2.1 |
| 0.456 | 92.2 | 2.9 |
表2 样品的测定(mg.g-1,n=3) |
样品 | 京尼平苷酸 | 绿原酸 | 京尼平苷 |
郧西杜仲皮 | 2.687 | 0.217 | 0.0736 |
郧西杜仲叶 | 0.449 | 10.03 | — |
通城杜仲皮 | 3.429 | 0.317 | 0.236 |
通城杜仲叶 | 1.240 | 9.753 | — |
注:“—”表示未检出 5 结论 实验结果表明,采用C18柱,以甲醇-水-冰乙酸(19∶81∶1.5)为流动相可同时分析杜仲中京尼平苷酸、绿原酸及京尼平苷的含量。本实验选用的水浸提法较传统的回流提取法提取效率明显提高[3,5],尤其适合热敏成分的提取。为评定杜仲及杜仲制品的质量提供了可靠的测定方法。 作者单位:戚向阳(华中农业大学食科系 武汉 430070) 参考文献: [1]张康健,张檀编.中国神树—杜仲.第一版.北京:经济管理出版社,1997.1 收稿日期:1998-10-09 |