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摘 要:目的:建立反相高效液相色谱法测定穿琥宁及其注射液的含量。方法:采用μBondpak
C18色谱柱,甲醇-水(70∶30)为流动相,250
nm为检测波长,室温下对穿琥宁及其注射剂进行含量测定。结果:能将穿琥宁及其主要杂质穿心莲内酯进行分离;穿琥宁在25~400
μg.mL-1范围内,峰面积与其浓度线性关系良好(r=0.999
9);样品平均回收率为100.6%;日内精密度RSD为1.08%(n=5),日间(10 d内)精密度RSD为2.06%(n=5)。结论:该法简便、快速、专属性强,可以满足其原料和制剂的质量控制要求。 Determination
of the Content of Potassium Zhang Dan Zeng Jingze Li Meng Abstract:Objective:To establish
a method using RP-HPLC for determination of the content of potassium
dehydroandrographolide succinate and its injections.Method:The instrument was LC-3A HPLC with
a μBondapak
C18 column (25 cm×4.6 mm,10 μm),the
mobile phase was methanol-water(70∶30) and the flow rate was 1.0 mL.min-1.
The UV detection wavelength was 250 nm and column temperature was
room temperature.Results:It can separate the potassium dehydroandrographolide
succinate and its primary impurity andrographolide. The calibration
curve was linear(r=0.999 9)within the range of 25~400 μg.mL-1
for potassium dehydroandrographolide succinate, the mean recovery
was 100.6%, the within-day precision RSD was 1.08%(n=5) and day-to-day
precision RSD was 2.06% (n=5) at three drug levels. Conclusion:This method is simple, quick and
specific, suitable for the quality control of the drug and its preparation. 穿琥宁(脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐,Potassium Dehydroandrographolide Succinate)是一种以穿心莲内酯为原料,经与琥珀酸酐等反应而制得的半合成药物,具有明显的抗炎解热作用,对病毒性肺炎、病毒性上感及急性细菌性痢疾等有较好疗效[1]。穿琥宁的含量测定,目前国内普遍采用分光光度法[2~4]。本文建立的反相高效液相色谱法,能将穿琥宁与有关杂质峰进行有效分离,不仅可测定穿琥宁及其注射剂的含量,而且可作为药物鉴别依据。该法简便、快速、灵敏度高、专属性强,国内外文献尚未见报道。该法适用于穿琥宁及其制剂的生产、贮存及临床应用中的质量控制。 1 仪器与色谱条件 日本岛津LC-3A液相色谱仪,SPD-1型紫外检测器,C-R1A型色谱数据处理机;美国Rheodyne
7725型液相色谱进样器。 2 药品及试剂 穿琥宁对照品:四川宜宾制药厂提供,含量:99.98%;穿心莲内酯对照品:中国药品生物制品检定所提供;穿琥宁原料及其注射剂:四川宜宾制药厂生产。实验用水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯。 3 线性范围 精密称取穿琥宁对照品适量,用50%甲醇溶解并稀释成含穿琥宁500
μg.mL-1的贮备液,冰箱内4
℃保存;精密量取该贮备液适量,用50%甲醇配成含穿琥宁分别为25,50,100,200,300,400
μg.mL-1的标准溶液,各进样20
μL,按色谱条件测定。以穿琥宁峰面积(Y)对标准溶液浓度(X)进行线性回归,得回归方程: 4 回收率试验 4.1 穿琥宁原料加样回收率试验 精密称取已知含量(99.96%)的穿琥宁原料适量,用50%甲醇溶解并配成一定浓度的溶液,加入不同量的穿琥宁对照品,依法进行回收率试验。5次测定结果平均回收率为100.7%~101.9%,RSD为1.18%。 5 精密度试验 精密称取穿琥宁原料适量,用50%甲醇溶解并配成高、中、低3种浓度的溶液,同法测定后代入当日标准曲线求出其含量,考察日内及日间(10 d内)精密度。5次测定结果日内RSD<1.16%,日间RSD<2.54%。 6 样品测定 6.1 原料药含量测定 取样品约15 mg,精密称定,置100 mL量瓶中,用50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀;精密量取20
μL,注入色谱仪,记录色谱图(图1-A),量取峰面积,代入当日标准曲线求出穿琥宁含量。结果见表1。 表1 穿琥宁原料含量测定结果(n=5) |
批号 | 样品量/ | 测得量/ | 含量/ | RSD/ |
970901 | 153.2 | 152.6 | 98.89 | 1.17 |
970902 | 149.0 | 148.4 | 98.71 | 1.47 |
970903 | 152.9 | 152.2 | 98.76 | 1.45 |
971201 | 153.2 | 153.2 | 99.96 | 2.24 |
图1 穿琥宁样品色谱图 表2 穿琥宁注射液含量测定结果(n=5) |
批号 | 样品量/ | 测得量/ | 标示百分含 | RSD |
970510 | 200.0 | 170.6 | 85.28 | 1.29 |
970608 | 200.0 | 180.4 | 90.19 | 1.58 |
971210 | 200.0 | 209.4 | 104.7 | 1.59 |
980301 | 200.0 | 219.9 | 109.9 | 1.00 |
7.1 按中国药典1995年版附录ⅤD规定方法,以穿琥宁峰计算色谱柱的理论塔板数约为1
780,穿琥宁与杂质穿心莲内酯的分离度约为4.3(见图1)。故建议用于穿琥宁含量测定的色谱柱,按穿琥宁峰计算的理论塔板数应不小于1
500,以确保其与溶剂峰及可能存在的杂质的分离度符合要求。 作者单位:张丹(华西医科大学药学院 成都 610041) 参考文献: [1]邓文龙,聂仁吉,刘家玉等.穿心莲制剂炎宁—3药理作用初步研究.中草药通讯,1978,(8):26 收稿日期:1998-11-10 |