高效液相色谱法测定石杉碱甲片的含量

摘　要　采用高效液相色谱法测定石杉碱甲片的含量。固定相为μ Bondapak
C18，流动相为乙腈—0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(12∶88)，以对乙酰氨基酚
为内标，石杉碱甲浓度在10～50mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系，平
均回收率为99.93％，RSD为0.41％(n=9)。
关键词：高效液相色谱法  石杉碱甲  片剂

石杉碱甲(Huperzine A)系从石杉科石杉属植物千层塔中分离得到的新
生物碱，是一种强效胆碱酯酶抑制剂，主要用来治疗重症肌无力和中老年记
忆减退及早老性痴呆记忆减退等症［1，2］。其片剂已收载于卫生部新药部
颁标准［3］，含量测定方法采用提取后UV吸收系数法，因其规格很小(每片含
甲杉碱甲0.05mg)，辅料加入量大，所以提取、蒸干后测紫外吸收度时，不
仅操作繁琐，而且每一步操作都直接影响测定结果。本文采用高效液相色谱
法，操作简便，结果准确，并与紫外法［3］进行了比较。

1  仪器与试药

日本岛津LC—6A高效液相色谱仪，SPD—6AV紫外检测器，C—R6A数据处理机。

石杉碱甲对照品(含量99.5％以上)由A厂提供，石杉碱甲片(0.05mg/片)
由B厂提供，内标物对乙酰氨基酚(99.5％以上)由C厂提供，乙腈为HPLC级，
磷酸二氢钾和盐酸为分析纯。

2  色谱条件

色谱柱：μ Bondapak C18填料，3.9mm×300mm，10μm(Waters公司出品)；
流动相：0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH4.5)—乙腈(88∶12)；流速：1.0mL/min；
检测波长：302nm。

3  溶液的配制

3.1  对照品溶液  精密称取石杉碱甲对照品约15mg，置100mL量瓶中，加0.01mol/L
盐酸溶液溶解并稀释至刻度，备用。

3.2  内标溶液   称取对乙酰氨基酚适量，加少量甲醇溶解后，用0.01mol/L
盐酸溶液制成2g/L溶液，备用。

4  线性范围的测定

精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置15mL量瓶，各
精密加入内标溶液2.0mL，用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，取20μL注入液
相色谱仪，记录色谱图。以石杉碱甲和内标物的峰面积比Y对浓度X(mg/L)进行
线性回归，在浓度10～50mg/L浓度范围内，两者呈良好的线性关系，线性方程为：
Y＝0.0339X-0.0142  r＝0.9998

5  精密度试验

精密量取对照品溶液3.0mL，置10mL量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶液稀释至
刻度，精密量取稀释液5.0mL和内标溶液1.0mL，混匀，重复进样6次，RSD为0.21％。

6  回收率试验

精密称取已准确测定含量的样品细粉适量，各精密加入对照品溶液1.0、2.0
和3.0mL，照样品测定项下的方法，测得回收率分别为99.93％、99.87％、100.00％，
RSD为0.38％、0.40、0.44％(n＝3)。

7  辅料空白试验

按处方配比投入除主药外的辅料适量，按样品测定项下的色谱条件试验，结
果在对照品峰(9min)和内标峰(5.8min)处均未出现色谱峰，辅料在2.6min处出峰，
故辅料不干扰测定。

8  样品测定

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于石杉碱甲0.4mg)，置
10mL量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液稀释至刻度，振摇，滤过，精密量取续滤液5.0mL，
精密加入内标溶液1.0mL，混匀，进样20μL，求得结果，并与紫外法进行比较，结
果见表1和图1。

表1 样品测定结果(％，n=2)

图1 样品色谱图

1.辅料(2.6min) 2.内标(5.8min)

3.石杉碱甲(9.0min)

9  讨论

9.1   流动相中的缓冲液若用水代替，则样品不出峰，而缓冲液的浓度大小
(0.002～0.02mo/L)似乎对色谱行为无影响。

9.2  测定样品时，如滤纸滤过后溶液仍显浑浊，可用0.45μm滤膜滤过。

9.3   由实验结果可见，两种方法测得的含量差异较大，采用提取后吸收系数
法测定，结果明显偏低，而用HPLC法测定，则结果较准确。

参考文献

1 朱晓东等.石杉碱甲和乙促进小鼠的空间辨别学习和记忆.药学学报，
1987，22(11)：812

2 王月娥等.石杉碱甲的抗胆碱酯酶作用.中国药理学报，1986，7(2)：110

3 卫生部新药标准(试行).WS-446(X-386)-95

Determination of Huperzine A in Tablets by HPLC

Zhang Minbo

(Zhejiang Institute for Drug Control,Hangzhou,310004)

Abstract:A HPLC method was established for the determination of huperzine A
in tablets.A reverse-phase μ Bondapak C18 column was used with acetonitrile-0.02mol/L
potassium dihydrogen phosphate solution(12∶88)as the mobile phase and UV detection
at 302nm.The internal standard was acetaminophen.A good linearity was obtained in the
range of 10～50mg/L.The average recovery was 99.93％(n=9),RSD=0.41％.
Key words:HPLC,huperzine A,tablets