高效液相色谱法测定血清中芦氟沙星及药代动力学研究

　　摘　要　
目的：建立HPLC法测定芦氟沙星血药浓度，研究其药代动力学过程。
方法：用ODS柱(150x4.6mm),流动相为0.03mol.L^-1磷酸-乙晴-40%氢氧化四丁铵溶液(80:7:1,v/v)的混合液,吡哌酸为内标物。
结果：在0.4～4.0μg^.ml^-1范围内呈良好的线性关系，回归方程为Y=2.330X-0.100,r=0.990 4，回收率为91.7%～102.0%。
结论：适用于药动学研究，测定结果为临床合理用药提供了依据。

DETERMINATION OF LOFLOXACIN BY HPLC IN HUMAN SERUM AND STUDY OF PHARMACOKINETICS

Jiang Lifu，Zheng Yi，Ma Yaping，Xiao Yong
(The 5th Hospital of PLA,Yinchuan　750004)

　　Abstract　AIM A sensitive HPLC method has been developed for the determination of Lofloxacin in human serum.METHODS Lofloxacin analysis was carried out by using ODS column (150x4.6mm,ID).The mobile phase consisted of 0.03mol^.L^-1 phosphoric acid:acetonitrile:tetrabuty lammon hydroxide (80∶7∶1,v/v).Pipemidic acid was used as an internal standard.RESULTS The method has good linearity betwcen 0.4～4.0μg^.ml^-1.The regression equation is Y=2.330X-0.100,r=0.990 4.Recovery rate varied from 91.7% to 102.0%.CONCLUSION The method can be used in pharmcokinetics.
　　Key Word　HPLC；Lofloxacin

　　芦氟沙星为一种新型广谱氟喹诺酮类国家级二类抗菌药。目前不少医院已开始应用于临床,但有关该药的研究多为临床疗效观察。笔者参考了国外有关文献,建立了快速,简便易行的血清芦氟沙星浓度的HPLC测定法,适用于芦氟沙星的临床药动学、药效学及药物相互作用方面的研究。

1　 仪器与试药
1.1　仪器　高效液相色谱仪，附SPD-10A紫外检测器。LC-16AT高速恒流泵。C-R6A数据处理机(均为日本岛津)。
1.2　试剂　芦氟沙星标准品(武汉滨湖制药厂,批号 960911),吡哌酸(华北制药厂，批号 960405),40%氢氧化四丁铵溶液;5-磺基水扬酸的50%甲醇溶液(西安雁塔化学试剂厂);磷酸(GR,北京红星化工厂);乙晴(GR,北京防化化工厂)。LG-10-2A高速离心机(北京医用器械厂)。

2　方法与结果
2.1　色谱条件　流动相为0.03.mol^.L^-1;磷酸-乙晴-40%氢氧化四丁铵溶液(80∶7∶1,v/v)的混合液,流速1.2mol^.L^-1;进样10μl,检测波长293nm,灵敏度0.02AUFS,纸速0.25cm/min，温度 室温。
2.2　标准曲线的绘制　芦氟沙星标准品溶液的制备:精称芦氟沙星对照品8.0mg,置50ml量瓶中,加0.03mol^.L^-1磷酸溶液溶解并稀释至刻度。摇匀,制成160μg^.ml^-1芦氟沙星溶液,室温保存。内标溶液的制备:精称吡哌酸20.0mg,置50ml量瓶中,加0.03mol^.L^-1磷酸溶液溶解并稀释至刻度,制成40μg^.ml^-1内标溶液,室温保存。血清样品处理:取人血清180μl加内标物溶液20μl,振荡混匀,加入5-磺基水杨酸50%甲醇溶液200μl振荡30s,使其充分沉淀。离心5min 10 000r/min室温保存备用。分别制含芦氟沙星0.04、0.10、0.40、1.0、和4.0μg^.ml^-1的人血清，用上述方法进行预处理和测定,计算芦氟沙星与内标物色谱峰高之比,以此比值(Y)与浓度(X)作标准曲线,线性回归方程为:
Y=2.330X-0.100,r=0.996 4(n=5)。
2.3　回收率试验　选择浓度为0.02、0.20和2.00μg^.ml^-1的芦氟沙星人血清进行回收率试验,计算回收率分别为102.0%、95.4%、91.7%。
2.4　精密度试验　分别制成浓度为0.02、0.20和2.0μg^.ml^-1的芦氟沙星人血清各3份,于同日内进行样品预处理和测定,每份样品各3次,计算RSD分别为0.7%、3.4%和4.2%。同时每一浓度于同一日内测定3次,连续测3d,计算日间RSD分别为8.0%、6.9%和4.2%。
2.5　健康人血药浓度测定　8名健康志愿者单剂量口服芦氟沙星200mg,以150ml温开水送下,服药后2h进标准餐。分别于服药前取血3ml,分离血清作空白对照，服药后0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、15.0h静脉取血2.5ml,分离血清后按上述方法处理测定,绘制药-时曲线图(图1)。

图1　健康志愿者口服芦氟沙星后药-时曲线

　　将药-时数据用PKBP-N1药代动力学程序在IBM微机处理,曲线拟合后选择房室模型,药动学参数计算结果见表1。

表1　口服芦氟沙星人体内药代动力学参数

T (h)

α(h^-1)

β(h^-1)

K_a(h^-1)

K₁₂(h^-1)

K₂₁(h^-1)

K₁₀(h^-1)

K_a1/2(h)

K_β1/2(h)

T_a1/2(h)

0.25±0.14

0.92±0.42

0.10±0.01

1.88±0.54

0.37±0.26

0.44±0.18

0.22±0.07

0.86±0.34

6.77±0.60

0.039±0.10

3　讨　论
　　本文建立了人血清芦氟沙星HPLC法,该法快速,简便,准确性好,灵敏度高。本法只需普通ODS色谱柱,不需加热,进样量少,样本不需特殊处理,经离心后的上清液可直接进样测定。研究结果表明,血清芦氟沙星的药-时数据经计算机拟合后,最适合的药代动力学模型为二室开放模型(r=0.9840)。由表1的药代动力学参数可以认为，口服芦氟沙星在人体内的吸收速度较快,1.5h左右即达到血药浓度的最高峰。药物随即由中央室向周边室快速分布,t为0.87h。同时药物在体内排泄或代谢消除时间为6.49h。此结果与国外研究报道基本一致，为临床合理用药提供了依据。

作者简介：江立富，男，主管药师。

作者单位：中国人民解放军第5医院　银川　750004

参考文献：
1　white Lo, Maco Gowan-AP.Lovering AM.et al.A preli-minary report on the pharmacokinetics of ofloxacin.desmethyl ofloxacin N-oxide inpatients with chronic renal failure,Drugs 1987；34;56
2　Lode H,Hoffen G.olschewski et al.pharmacokinetics of ofloxacinafter parenteral and oral administration.Antimicrobial.Agcnts and chemotheraphy,1987；9;1338
3　Dudley MN,Ericosonl Zinner SH.Effect of doseon serum pharmacokinetics of intravenous ciprofloxacin with indentification and characterization of extravascular compartments using noncompartmental and compartmental chemotherapy.pharmacokinetic models.Antimicrobial Agnts and Chemoth-erapy，1987；11：1782

(本文编辑　王绪明)

收稿日期：1998-11-12
修改日期：1999-05-09