高效液相色谱法测定鱼腥草中槲皮素的含量

　　摘　要　
目的：建立鱼腥草中槲皮素的反相高效液相色谱法，并用该法对不同产地鱼腥草中槲皮素的含量进行测定。
方法：采用Alltima C₁₈硅胶柱，以乙腈-0.4%磷酸（45：55）为流动相；370nm波长处检测；流速： 1.0ml^.min^-1；柱温：30℃。
结果：线性范围为0.24～1.20μg，相关系数r=0.999 6，平均回收率为96.30%,RSD=1.19%。
结论：该方法简便、准确，适合于对鱼腥草进行质量控制。
　　

DETERMINATION OF QUERCETINUM IN HOUTTUYNIA CORDATA THUNB BY HPLC

Liu Wenyao
(Institute for Drug and Instrument Control of PLA Beijing　100071)
Liang Aijun，Bai Hao
(Department of Chinese Medicine,First Medical University　510515)

　　Abstract　AIM To develop a HPLC method for determination of quercetinum and study the difference of Houttuynia cordata Thunb from different districts.METHODS Quercetinum was determined by HPLC on Alltima C₁₈ column 250mm(4.6mm,5μm) at 30℃ with acetonitrile-0.4% phosphoric acid ( 45∶55) as the mobile phase.Detection wavelength was 370nm. The flow rate was 1.0ml/min.RESULTS The calibration curve of quercetinum was 0.24～1.20μg(r=0.999 6).The average recovery of quercetinum were 96.30%（RSD=1.19%）.CONCLUSION The method was simple and accurate and apt to control the quality of Houttuynia cordata Thunb.
　　Key words　HPLC；Houttuynia cordata Thunb；Quercetinum

　　鱼腥草为三白草科蕺菜属植物蕺菜（Houttuynia cordata）的全草，具有清热解毒、止咳化痰之功效，尤其抗菌、抗病毒作用明显^［1］。鱼腥草中含鱼腥草素（癸酰乙醛）、槲皮甙、槲皮素、芦丁、金丝桃甙等黄酮甙及氯原酸、谷甾醇、石竹烯、芳樟醇、柠檬烯等^［2］。其中所含以槲皮素为甙元的黄酮甙槲皮甙、芦丁、金丝桃甙等相对较多，槲皮素的含量测定方法有薄层扫描法、高效液相色谱法等^［3］。本法选择先用酸水解，再测定其甙元槲皮素的含量来控制本品质量，方法简便、准确。

1　仪器与试药
　　高效液相色谱仪：HP1050 —DAD 系统（美国惠普公司）；试剂：水为超纯水；乙腈为色谱纯；其余均为分析纯；对照品：槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所）；样品：分别购自北京和河北安国。

2　实验条件
2.1　色谱条件　色谱柱：Alltima C₁₈ (5um,4.6mm×250mm)，流动相：乙腈-0.4%磷酸（45：55），流速：1.0 ml^.min^-1，检测波长：370nm，柱温：30℃。按以上条件分析，样品分离色谱图见图1。

图1　槲皮素对照品与样品色谱图
A 对照品　B 样品

2.2　检测波长的确定　槲皮素对照品色谱峰在200nm～600nm范围内扫描，结果在258nm、370nm处有最大吸收，但在258nm处槲皮素峰与其他杂质峰未能达到基线分离，在370nm处可达到基线分离，故选择以370nm处为检测波长，结果见图2。

图2　样品测定成分与对照品光谱比较
1 槲皮素对照品　2 样品

3　实验方法
3.1　供试品溶液的制备　取鱼腥草药材适量，研细，精密称取1g，加5%硫酸乙醇溶液40ml，置水浴上加热回流4h，趁热滤过，残渣加乙醇5ml洗涤，合并滤液，加乙醇稀释至50ml，作为供试品溶液。
3.2　对照品溶液的制备　精密称取槲皮素对照品适量，加乙醇制成60μg^.ml^-1的溶液，作为对照品溶液。
3.3　样品测定方法　准确吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件，依法测定。
3.4　线性关系的考察　取浓度为60μg^.ml^-1的槲皮素对照品乙醇溶液，分别进样4、8、12、16、20μl，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标，槲皮素进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为：
Y=358634X+4502,r=0.999 6。
　　表明测定成分在0.24～1.20μg范围内具有良好的线性关系。
3.5　精密度试验　精密吸取对照品溶液5μl，重复进样5次，槲皮素峰面积积分值的相对标准偏差RSD=0.83%。
3.6　稳定性试验　精密吸取供试品溶液5μl，按3.3法测定，结果表明供试品在4h内有良好的稳定性。
3.7　回收率试验　取已知含量样品加入对照品适量，依法测定，结果平均回收率为96.30%，RSD=1.19%（n=5）。
3.8　样品测定　分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各5μl，按上述色谱条件测定，以外标两点法计算样品中槲皮素甙元类黄酮的含量，不同产地样品的测定结果见表1。

表1　鱼腥草中槲皮素的含量测定结果

鱼腥草

槲皮素含量（%）

河北安国(1)

0.33

河北安国(2)

0.20

河北安国(3)

0.41

北京

0.43

　　注：购自河北安国的鱼腥草分(1)(2)(3)为不同批号

4　讨　论
4.1　为了使槲皮素甙元类黄酮甙均水解为甙元，选用5%硫酸乙醇加热回流水解。实验表明，水解4h已基本水解完全。
4.2　流动相分别选择了甲醇-0.4%磷酸溶液（55∶45）、（70∶30）、（40∶60）；乙腈-0.4%磷酸溶液（30∶70）；（45∶55）等进行考察，结果以乙腈-0.4%磷酸溶液（45∶55）分离效果好。

作者简介：刘文尧，男，学士，药师。

作者单位：刘文尧（中国人民解放军总后卫生部药品仪器检验所　北京　100071）
白皓（中国人民解放军第一军医大学中药系　广州　510515）

参考文献：
1　阴健，郭力弓.中药现代研究与临床应用（1）.北京：学苑出版社，1994；457～459
2　沙世炎，严敏如，曾纪琰等.中草药有效成分分析法.北京：人民卫生出版社，1982；163～169
3　王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994；484～485

(本文编辑　王绪明)

收稿日期：1999-07-12
修改日期：1999-11-16