高效液相色谱法测定消炎利胆片中穿心莲内酯的含量

摘　要　
目的：测定消炎利胆片中穿心莲内酯的含量。
方法：采用高效液相色谱法，色谱条件为，流动相：甲醇-水(50∶50)，检测波长225nm，外标峰面积定量。
结果：进样量在2.02～10.10μg范围内线性关系良好，平均加样回收率为100.30%，RSD =0.73%。
结论：本测定方法简便、准确、重现性好，可用于测定消炎利胆片中穿心莲内酯的含量。

DETERMINATION OF ANDROGRAPHOLIDE IN XIAOYAN LIDAN PIAN BY HPLC

Zhao Qinghua，Wang Hailong，Liu Xin，Feng Jijun
(Institute for Drug Control of Ji’nan Military Region of PLA，Ji’nan　250022)

　　Abstract　AIM To determine the andrographolide in Xiaoyan Lidan pian.METHODS The HPLC method was used and the chromatography consisted of Shim-pack CLS-ODS column.the mobile phase was CH₃OH-H₂O(50∶50).The determination wavelength was 225nm.RESULTS Good linearity was obtained in the range of 2.02～10.10μg,the recovery could reach 100.30% and RSD=0.73%.CONCLUSION The method was proved to be simple,accurate and reproducible.It could determine the andrographolide in Xiaoyan Lidan pian.
　　Key words　HPLC;Andrographolide;Xiaoyao Lidan pian

　　消炎利胆片系由穿心莲、溪黄草、苦木等药材组成的复方制剂，具有消炎及利胆功效。部颁标准^［1］对其总内酯规定了含量限度，其主要成分穿心莲内酯的含量未单独测定。文献报道消炎利胆片中穿心莲内酯的测定方法有薄层色谱扫描法^［2］、HPLC法^［3］。为进一步完善其质量控制标准，我们建立了高效液相法测定消炎利胆片中穿心莲内酯的方法。此法操作简便快速，准确，现报道如下：

1　仪器与试剂
1.1　仪器　岛津LC-6A高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外检测器，C-R4A数据处理机。
1.2　试剂　穿心莲内酯对照品(中国药品生物制品检定所提供)，消炎利胆片(市售品，批号 981003、981105、981108)，甲醇为色谱纯。

2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱：Shim-pack CLS-ODS柱(60×15mm)，柱温35℃，流动相：甲醇-水(50∶50)，检测波长：225nm，流速：1.0ml^.min^-1。色谱图见图1，从色谱图上看出空白液对穿心莲内酯的测定无影响。

图1　色谱分离图
A 穿心莲内酯对照品　B 消炎利胆片　C 空白

2.2　对照品溶液的制备　精密称取于105℃干燥至恒重的穿心莲内酯对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含1.01mg的对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备　取消炎利胆片20片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于消炎利胆片5片)于锥形瓶中，加乙醇50ml，放置3h，再超声提取30min，滤过，滤渣用适量乙醇洗涤，合并滤液与洗液，蒸干，加无水乙醇溶解，定量转移至25ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.4　标准曲线的绘制　准确吸取对照品溶液2、4、6、8、10μl进样，在225nm处测定，峰面积分别为：2 448 426、5 209 128、7 795 930、10 720 600、13 561 190。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标制作标准曲线回归方程为
Y=1373119X-374045,r=0.999 7
　　结果在2.02～10.10μg时呈良好线性关系。
2.5　精密度试验　取对照品溶液，准确进样10μl,重复5次，测得峰面积分别为：15 434 166、15 700 787、15 813 406、15 912 700、15 728 836，求得RSD值为1.14%。
2.6　加样回收率试验　精密称取已知含量的消炎利胆片粉末0.502 7g，精密加入穿心莲内酯对照品5.05mg，依2.3制备供试品溶液，准确进样10μl，测定，代入标准曲线，计算回收率结果见表1。

表1　回收率试验结果(n=6)

投入量
(mg)

测得量
(mg)

回收率
（%）

平均回收率
（%）

RSD
（%）

5.05

5.04

99.80

5.05

5.06

100.20

5.05

5.03

99.60

100.30

0.73

5.05

5.10

100.99

5.05

5.12

101.39

5.05

5.04

99.80

2.7　重复性试验　取同一批号消炎利胆片，照样品测定方法测定5次，求得RSD=1.23%。
2.8　样品含量测定　依2.3制备3个生产厂家共3批样品的供试品溶液，准确进样10μl,按标准曲线回归方程，计算每片穿心莲内酯的含量，结果见表2。

表2　样品测定结果(n=3)

批　号

每片穿心莲内酯含量(mg)

RSD值(%)

981003

0.98

0.94

981105

1.15

1.21

981108

1.27

1.30

3　讨　论
3.1　样品提取中我们曾采用不同浓度的乙醇溶液，结果发现乙醇浓度在60%～80%时提取液颜色明显加深，放置后容易出现沉淀现象，色谱图中杂峰也较多。当用95%乙醇提取时，色谱图中杂峰明显减少，而穿心莲内酯含量反而高于用60%～80%乙醇提取液，因而建议样品提取过程中采用95%乙醇提取较为适宜。
3.2　对3个生产厂家共3批样品我们采用部颁标准对其总内酯进行测定，结果发现样品中穿心莲内酯的含量与总内酯的含量有一定的相关性，说明控制消炎利胆片中穿心莲内酯的含量对其质量控制有一定的意义。

作者简介：赵庆华，女，主管药师。

作者单位：中国人民解放军济南军区联勤部药品检验所　济南　250022

参考文献：
1　中华人民共和国卫生部药品标准(中药成方制剂，第十册)1995；156～157
2　王泽芳，傅小英，赵英等.薄层扫描法测定消炎利胆片中穿心莲内酯的含量.中成药，1997；19(7)：15
3　张艺，孟宪丽，赖先荣等.RP-HPLC测定穿心莲片中穿心莲内酯的含量.中草药，1995；26(4)：191

(本文编辑　王绪明)

收稿日期：1999-11-12
修改日期：1999-11-18