高效液相色谱法测定疏络止痛胶囊中粉防己碱的含量

　　摘　要　目的：测定疏络止痛胶囊中粉防己碱的含量。方法：RP-HPLC法选用C₁₈分析柱，流动相：甲醇-水-二乙胺(82∶18∶0.2)，检测波长为283nm，流速：1.0ml^.min^-1，柱温：40℃。结果：该法平均回收率为98.12%，RSD=1.06%（n=5）。结论：本法快速、准确，样品处理简便易行，重现性好。

DETERMINATION OF TETRANDRINE IN SHULUOZHITONG CAPSULES BY RP-HPLC

Qin Honglin
(Institute for Drug Control of Beijing Command of PLA，Beijing　100071)
Cao Hong
(Institute for Drug and Instrument Control of PLA,Beijing　100071)

　　Abstract　AIM To determine the concentrations of Tetrandrine in Shuluozhitong Capsule.METHODS RP-HPLC was used with a C18 column (250mm×4.6mm,5μm) with methanal-water-diethylamine(80∶18∶0.2) as mobile phase and the detective wave length was 283nm.RESULTS The mean recovery of this method was 98.12% and RSD was 0.44%(n=5),CONCLUSION This method is rapid,sensitive and accurate in defermining the concentraffas of Tefrandrin in shuluozhifong capsule.
　　Key words　RP-HPLC;Shuluozhitong Capsules;Tetrandrine

　　疏络止痛胶囊是由防己、丹参等中药组成的复方制剂，具有疏经通络、活血化淤、止痛之功效。君药防己中粉防己碱的含量测定方法，文献报道有薄层扫描法^［1］、高效液相色谱法^［2］，但采用高效液相色谱法测定成药中粉防己碱的含量，却未见报道。本文建立了用高效液相色谱法，测定复方制剂中粉防己碱（Tetrandrine）含量的方法，以控制成药的质量，效果良好，定量准确，快速。

1　仪器与药品
1.1　仪器　高效液相色谱仪： HP 1050-DAD系统(美国HP公司)。
1.2　试药　粉防己碱对照品（中国药品生物制品检定所提供)；疏络止痛胶囊（第二军医大学药学院，批号 980725、980826、980929）。甲醇为色谱纯，二乙胺为分析纯，超纯水。

2　色谱条件
　　Kromasil C₁₈分析柱（250mm×4.6mm 5μm）；流动相：甲醇－水-二乙胺(82∶18∶0.2)；检测波长：283nm；流速：1.0ml^.min^-1；柱温：40℃。见图1。

图1　疏络止痛胶囊高效液相色谱图
A 对照品　B 样品　1 粉防己碱

3　实验方法
3.1　对照品溶液的制备　精密称取粉防己碱对照品，以甲醇溶解后，制成0.35mg^.ml^-1的对照品溶液。
3.2　供试品溶液的制备　取本品内容物约1g，精密称定，加氨试液10ml，再加氯仿50ml超声10min，滤过，滤液再用氯仿100ml (50,50) 提取2次，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇定容至5ml量瓶中，摇匀，以0.5μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
3.3　线性关系及标准曲线　精密吸取粉防己碱对照品溶液2.5、5.0、10.0、15.0、20.0μl，依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，粉防己碱进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：
Y＝4.3907X-1.7228,r=0.9999（n=5）
　　结果表明，粉防己碱在89.5～716μg 范围内呈线性。
3.4　精密度实验　精密吸取对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件试验，重复测定5次，粉防己碱峰面积积分值的RSD为0.5%。
3.5　稳定性试验　取样品溶液（批号 980929），在0、0.5、1、2、3、4、6h分别进样10μl，记录峰面积，6次测定粉防己碱峰面积的RSD为0.7%，表明供试品溶液较稳定。
3.6　重复性实验　取同一批样品(批号 980929)5份，按样品测定法，测定5次，结果见表1。粉防己碱平均含量为0.267mg/粒，RSD为2.3%。

表1　疏络止痛胶囊重现性实验结果(n=5)

称样量（g）

含量(mg^.g^-1)

平均含量(mg^.g^-1)

RSD(%)

1.3381

0.71

1.0762

0.67

1.1124

0.70

0.69

2.3

0.9587

0.68

1.0891

0.69

3.7　加样回收率实验　取已知含量的样品约0.5g，精密加入粉防己碱对照品溶液适量，挥干，按3.2项下操作，计算回收率，测得粉防己碱平均回收率为98.12%，RSD为1.06%,结果见表2。

表2　疏络止痛胶囊中粉防已碱加样回收率测定结果(n=5)

称样
量(g)

相当粉防己
碱的量(mg)

加入粉防己
碱量(mg)

测得粉防己
碱量(mg)

回收率
(%)

(%)

RSD
(%)

0.3244

0.2238

0.2148

0.4356

98.6

0.3116

0.2150

0.2148

0.4279

99.1

0.3309

0.2283

0.2148

0.4371

97.2

98.12

1.06

0.3408

0.2351

0.2148

0.4430

96.8

0.3416

0.2357

0.2148

0.4481

98.9

4　供试品的测定　精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，按上述色谱条件测定，以外标法计算供试品中粉防己碱的含量，共测定3批供试品，结果见表3。

表3　疏络止痛胶囊中粉防已碱的含量(n=3)

批　　号

含量(mg^.g^-1)

980725

0.72

980826

0.78

980929

0.69

5　讨　论
5.1　测定波长的选择　我们对粉防己碱对照品溶液在190～700nm波长范围内进行光谱扫描，结果表明，粉防己碱在214、275、283nm处有吸收峰，以283nm灵敏度最高。采用283nm为本实验的测定波长，结果重复性好，灵敏度高。
5.2　流动相的选择　文献报道^［2］用高效液相法测定防己药材中粉防己碱的含量，选用甲醇-二乙胺（500∶0.05）作为流动相，经试验对本复方制剂不适合。我们又对下列流动相进行了试验：甲醇-水（60∶40）；甲醇-水（80∶20）、（70∶30）；甲醇-水-二乙胺（80∶20∶0.05）；甲醇-水-二乙胺（85∶15∶0.5）；甲醇-水-二乙胺（82∶18∶0.2）等，结果以甲醇-水-二乙胺（82∶18∶0.2）分离效果最理想，最后选定为本实验流动相。
5.3　供试品溶液提取方法的选择　根据游离生物碱易溶于氯仿的特性，将其在碱性条件下用氯仿提取。

作者简介：秦红霖，女，主管药师。

作者单位：秦红霖（中国人民解放军北京军区药检所　北京　100071）
曹红（中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪器检验所　北京　100071）

参考文献：
1　王素英，万丽，严冬.双波长薄层扫描法测定类风擦剂中粉防己碱的含量.中成药，1998；20 (10)：16
2　江俊，乔明，刘超英.中药防己中汉防己甲素的高效液相色谱法定量分析.中国医院药学杂志，1995；15（9）：406

(本文编辑　梁爱君)

收稿日期：1999-02-03