高效液相色谱法测定退烧冲剂中黄芩苷的含量

　　摘　要　目的：测定退烧冲剂中黄芩苷的含量。方法：采用HPLC法，C₁₈柱，流动相醋酸缓冲液（pH4.5）-甲醇(1∶1)，检测波长254nm。结果：黄芩苷在0.5～10mg^.L^-1浓度范围内线性关系良好，r＝0.9998，平均回收率98.6%，RSD为1.59%。结论：所建立的含量测定方法简便、准确，可作为该产品的质量控制方法。

DETERMINATION OF BAICALIN IN TUISHAO CHONGJI BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY

Ma Xiujing，Yuan Cheng，Li Rong
(General Hospital of Jinan Military Region,Ji’nan　250031)

　　Abstract　AIM To establish a RP-HPLC method for determination of Baicalin in Tuishao Chongji.METHODS The contents of Baicalin was determined by HPLC,using Spherisorb C₁₈(4×250mm) column,acetic acidbuffer（pH=4.5）-methanol(1∶1) as the mobile phase.The detective wavelength was 254nm.RESULTS The average recovery was 98.6% with the relative standard deviation (RSD) 1.59%(n=5).CONCLUSION This method is simple and accurate,Which can be used in the quality control of this product.
　　Key words　HPLC;Baicalin;Tuishao Chongji

　　退烧冲剂是我院自制制剂，主要由石膏、知母、黄芩、柴胡、金银花、大青叶组成。具有清热解毒、泻火等作用，临床用于治疗外感热症近20年，疗效确切。方中主药黄芩泻火解毒^［1］，黄芩苷为其主要有效成分。为控制产品质量，采用高效液相色谱法测定了退烧冲剂中黄芩苷的含量。

1　仪器与试药
Waters高效液相色谱仪；515 pump；U6K进样器,490紫外检测器；Baselin 810色谱工作软件（Waters公司）。岛津2101-PC 紫外分光光度计（日本岛津制作所）。
黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所）；退烧冲剂（本院制剂室，批号 970221，970107，961125，961011）。甲醇为色谱纯,醋酸为分析纯。

2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱Spherisorb C₁₈（5μm，4×250mm）；流动相:醋酸缓冲液（pH4.5）-甲醇(1∶1)，流速1.2ml^.min^-1；检测波长254nm;灵敏度：0.1AUFS,室温。
2.2　系统适应性试验　分别取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液(处方中除去黄芩，按供试品的制备方法制备)各10μl分别进样。在保留时间（t_R）6.7min处，供试品和对照品溶液中出现黄芩苷的色谱峰,而黄芩的阴性对照溶液未见此色谱峰。表明在本试验条件下，黄芩苷的测定不受其它杂质峰的干扰，结果见图1。

图1　对照品 样品及阴性对照品的HPLC图谱
A 黄芩苷对照品　B 样品　C 阴性对照品　a 黄芩苷色谱峰

2.3　标准曲线的制备　称取黄芩苷对照品2.5mg，精密称定，置于50ml容量瓶中，加入50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取0.10、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00ml对照品溶液置于10ml容量瓶中，用50%甲醇稀释并定容至刻度，摇匀。分别吸取10μl进样3次，以浓度C对峰高 H进行回归，结果在0.5～10mg^.L^-1浓度范围内呈良好的线性关系，回归方程为：
C=7.017×10^-3H-3.90，r=0.9998。
2.4　精密度试验　分别取浓度为0.5、2.5、5.0mg^.L^-1的对照品溶液各10μl,每个浓度重复进样5次,以峰高计算,黄芩苷的日内变异试验在同1d内测定；日间变异试验连续5d测定，结果见表1。

表1　黄芩苷对照品溶液的精密度试验结果(n=5)

黄芩苷浓度
（mg^.L^-1）

日　内

日　间

测得浓度
平均值（mg^.L^-1）

RSD
（%）

测得浓度
平均值（mg^.L^-1）

RSD
（%）

0.5

0.51

1.62

0.52

2.86

2.5

2.46

1.49

2.42

3.59

5.0

4.86

2.22

4.94

3.23

2.5　稳定性试验　精密吸取同一批供试品溶液10μl，每间隔0.5h进样一次，测定峰高，结果表明峰高积分值在3h内稳定，RSD为1.54%。
2.6　重现性试验　取同一批号样品（970107）5份，依法平行测定5次，结果RSD为3.64%(n=5)。
2.7　回收率试验　取己知含量的样品0.1g（批号970107,含量4.06mg^.g^-1）5份，精密称定，分别加入对照品溶液5ml，按样品含量测定项下操作，同法测定，结果见表2，平均回收率为98.6%，RSD为1.59%。

表2　退烧冲剂中黄芩苷的加样回收率试验

对照品加入量
(mg)

实测量
(mg)

回收率
(%)

平均回收率
(%)

RSD
(%)

0.252

0.255

101.2

0.252

0.248

98.4

0.252

0.245

97.2

98.6

1.59

0.252

0.246

97.6

0.252

0.249

98.8

2.8　样品测定　取不同批号的退烧冲剂样品0.1g，精密称定，用50%甲醇溶液溶解，滤至100ml容量瓶中，并自漏斗上稀释至刻度，摇匀。取少量溶液离心,上清液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，滤液作为供试品溶液。精密取对照品和供试品溶液各10μl，重复进样3次，依前法测定，据峰高以外标法计算样品中黄芩苷的含量，结果见表3。

表3　退烧冲剂含量测定结果

批　号

样品含量(mg^.g^-1)

RSD(%)

961011

4.35

1.68

961125

3.23

1.11

970107

4.06

2.04

970221

3.78

1.47

3　讨　论
3.1　有关黄芩苷的测定方法有紫外分光光度法^［2］，薄层扫描法^［3］，HPLC法^［4、5］等。本文在退烧冲剂含量测定中采用HPLC法，并对多种流动相及流动相的不同比例进行了筛选，结果以醋酸缓冲液（pH4.5）-甲醇(1∶1)为好；并且同法测定了阴性对照溶液，结果黄芩苷可以基线分离且不受其它组分干扰，分离效果好。
3.2　经过对多批样品中黄芩苷的含量测定表明，该方法简便、准确，可以控制产品的质量。

作者简介：马秀璟，女，博士研究生，主管药师。

作者单位：马秀璟（中国人民解放军济南军区总医院　济南　250031）
李熔（河南省洛阳市商业职工医院　洛阳　471000）

参考文献：
1　中国药典委员会.中华人民共和国药典.一部.广州:广东科学技术出版社，1995；270
2　石淑琴，郭军，阚志军.二阶导数法测定双黄连注射剂中黄芩苷的含量.中成药,1992；14(5):10
3　吕方军.薄层扫描法测定银黄注射液中绿原酸与黄芩苷的含量. 药物分析杂志,1988；8(4):236
4　齐彦敏.反相HPLC法测定清肺止泻冲剂黄芩苷的含量.中国中药杂志，1995；20(10):607
5　闵庆旺,张振清,阮金秀. 鼻炎康片中黄芩苷的HPLC定量法. 药物分析杂志，1991；11(6):358

(本文编辑　梁爱君)

收稿日期：1999-03-24
修改日期：1999-09-20