高效液相色谱法测定清喉咽颗粒剂中黄芩苷的含量

(总后卫生部药品仪器检验所　北京　100071)

　　摘要　　采用HPLC测定清喉咽颗粒剂中黄芩苷的含量，以甲醇—0.2 %磷酸溶液（70∶30）为流动相，检测波长为317 nm，黄芩苷在0～0.4920 μg范围内线性关系良好，r=0.9997。平均回收率为100.9 %，RSD=0.99 %(n=5)。方法简便，准确，灵敏。
关键词：反相高效液相色谱法　清喉咽颗粒剂　黄芩苷

　　清喉咽颗粒剂由黄芩、玄参、地黄等5味中药组成，具有养阴、清咽、解毒的功效，用于咽炎、急性扁桃体炎等的治疗。我们采用高效液相色谱法测定了黄芩中主要成分黄芩苷的含量，为控制成药质量标准提供了依据。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪：惠普HP 1050-DAD系统。
试剂：水为超纯水；甲醇为优级纯；其余均为分析纯。
对照品：黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所)。
样品：解放军总医院制剂室提供。
2　实验条件
2.1　色谱条件　色谱柱：Alltima C₁₈(5 μm，4.6 mm×250 mm)美国Alltech公司；流动相：甲醇—0.2 %磷酸溶液（70∶30），流速：1.0 mL/min；检测波长：317 nm；理论板数以黄芩苷峰计算应不低于4000。按以上条件分析，样品分离色谱见图1。

图1　对照品与样品色谱图
A.黄芩苷对照品　B.样品　C.阴性样品
1.黄芩苷

2.2　色谱峰紫外光谱一致性比较　对样品中所测成分色谱峰与黄芩苷对照品色谱峰在200～600 nm的紫外光谱进行比较，结果如图2。

图2　样品测定成分与对照品紫外光谱比较
1.黄芩苷对照品　2.样品

3　实验方法
3.1　供试品溶液的制备　取本品5 g，研细，取细粉约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇30 mL，密塞，超声处理20 min，放冷，滤过，滤液置50 mL量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器和残渣，洗液并入同一量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
3.2　对照品溶液的制备　精密称取在60 ℃真空干燥4 h的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.3 mg的溶液，作为对照品溶液。
3.3　样品测定方法　准确吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，依上述色谱条件，外标法进行测定。
3.4　线性关系的考察　精密称取在60 ℃真空干燥4 h的黄芩苷对照品6.15 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL 含黄芩苷24.60 μg的对照品溶液，精密吸取4、8、12、16、20 μL ，进样测定，以黄芩苷进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，回归方程为：
Y=2720.67X　r=0.9998
表明：测定成分在0～0.4920 μg范围内呈良好的线性关系。
3.5　精密度试验　精密吸取供试品溶液10 μL，重复进样5次，按正文所述色谱条件测定，峰面积积分值的RSD为0.48％。
3.6　稳定性试验　精密吸取供试品溶液10 μL,每间隔一定时间进样，测定，RSD为1.0 %。表明供试品溶液在1 d内基本稳定。
3.7　重现性试验　按供试品溶液制备方法处理同一批样品5份，依法测定,样品中黄芩苷含量的RSD为1.0 %。
3.8　回收率试验　准确称取已测知含量的样品，定量加入黄芩苷对照品适量，依法测定，结果5次测定的回收率为98.3 %～103.5 %，平均回收率为100.9 %，RSD为0.99 %。
3.9　样品测定　按样品测定方法测定3批成药样品,结果黄芩苷含量分别为28.39、28.62、29.10 mg/g。
4　讨论
关于黄芩苷测定方法文献报道较多，其中有比色法^［1］、薄层扫描法^［2］、高效液相色谱法^［3，4］等，其中以高效液相色谱法较简便。本实验流动相选择了甲醇—0.2 %磷酸溶液（60∶40）、( 70∶30) 等进行考察，结果以甲醇—0.2 %磷酸溶液（70∶30）分离效果好；对黄芩苷标准品液在200～600 nm范围内扫描，结果在280、317 nm处有吸收峰，以280 nm为检测波长灵敏度高，但有干扰，以317 nm为检测波长，黄芩苷峰可以与其它峰达到基线分离，实验证明本方法简易、快速，分离效果好。

参考文献
1　张乃吉等.茵栀黄注射液质量标准的探讨.中成药，1991，13(11)：11
2　吕方军等.薄层扫描法测定银黄注射液中绿原酸与黄芩甙的含量.药物分析杂志，1988，8(4)：236
3　闵庆旺等.鼻炎康片中黄芩甙的HPLC定量法.药物分析杂志，1991，11(6)：358
4　中国药典.1995.一部 ：606

(本文于1997年6月19日收到)

RP-HPLC Determination of Baicalin in Qinghouyan Granules

Liu Wenyao and Liu Yun

(Institute for Drug and Instrument Control of PLA，Beijing，100071)

　　Abstract:This assay presents the determination of Baicalin in Qinghouyan granules.Baicalin is separated by Alltima C₁₈ column(4.6 mm×250 mm)and detected at 317 nm.Mobile phase is methanol-0.2 % phosphoric acid solution(70∶30).The calibration curve is linear between 0～0.4920 μg with a correlation coefficient of 0.9997.The average recovery was 100.9 % with RDS of 0.99 %.The method is simple and quick with the high sensitivity.
　　Key words:RP-HPLC,Qinghouyan granules,Baicalin