HPLC法测定硝酸异山梨酯气雾剂的含量及每揿含量

山东省医药工业研究所　250100

　　硝酸异山梨酯为常用的抗心绞痛药，其气雾剂具有起效迅速，生物利用度高等特点，临床上常应用于各型冠心病、心绞痛的治疗和预防。卫生部标准^［1］采用比色法测定其含量和每揿含量，操作较为繁琐，本文改用高效液相色谱法进行测定,结果理想,操作简便。
1　仪器与试药
Waters 510型高效液相色谱仪及486型紫外检测器；沃特斯—大连化物所PC—800色谱工作站。
硝酸异山梨酯对照品(含量99.92 %)及气雾剂由本所提供；乙酰苯胺内标物由中国药品生物制品检定所分发；甲醇为优级纯。
2　色谱条件
色谱柱:Nova-Pak C₁₈(4 μm，3.9 mm×150 mm)；流动相:甲醇—水(32∶68)；流速:1.0 mL/min；检测器波长:220 nm；柱温:室温。
3　线性关系试验
精密称取硝酸异山梨酯对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释成4 mg/mL的溶液，精密量取1.0、2.0、3.0、5.0、7.0 mL，分别置25 mL量瓶中，各精密加入内标溶液(精密称取乙酰苯胺适量，加甲醇制成2 mg/mL的溶液)1 mL，加流动相稀释至刻度，摇匀。取10 μL 注入液相色谱仪，得色谱图(见图1)。以硝酸异山梨酯与内标峰面积比(Y)对浓度(X)进行线性回归，得回归方程:
Y=3.9418x+0.0058　r=1.0000
结果证明硝酸异山梨酯在160～442 mg/L范围呈良好线性关系。

图1　色谱图
1.内标(3.5min)　2.硝酸异山梨酯(6.3min)

4　校正因子测定及重现性试验
取硝酸异山梨酯对照品约300 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取此液与内标溶液各1 mL，置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，取10 μL注入色谱仪，按峰面积计算校正因子。经取同一样品反复进样6次进行重现性试验，硝酸异山梨酯峰面积与内标峰面积之比的RSD为0.28 %。
5　回收率试验
取已知含量的硝酸异山梨酯气雾剂1瓶，精密量取0.5 mL及校正因子测定项下的对照品溶液0.5 mL，置25 mL量瓶中，精密加入内标溶液1 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀。取10 μL注入色谱仪，计算，5份样品的平均回收率为100.2 %，RSD为0.62 %。
6　含量测定
取硝酸异山梨酯气雾剂1瓶，精密称定，除去阀门铝盖，精密量取溶液1 mL，置25 mL量瓶中，加入内标溶液1 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀。取10 μL注入液相色谱仪，用内标法按峰面积计算每瓶含硝酸异山梨酯的克数，另将空瓶连同阀门铝盖洗净烘干，精密称定，与原重量之差即为药液的重量，用已测定的硝酸异山梨酯的含量与之相比，求出药液的浓度，结果见表1。

表1　含量测定结果(n=2)

批号

HPLC法

部标法

标示量%

药液浓度/%

标示量%

药液浓度/%

1

93.03

1.13

94.80

1.15

2

96.22

1.15

97.06

1.19

3

96.60

1.15

96.57

1.15

7　每揿含量测定
取本品1瓶，将套口对准下接25 mL量瓶的漏斗中，揿压喷射20次，用流动相洗净套口和漏斗，并将洗涤液收集于量瓶中，加内标溶液1 mL，加流动相稀释至刻度，摇匀。取10 μL注入液相色谱仪，以内标法计算，求出每揿含药量。结果见表2。
8　讨论
8.1　用本法测定硝酸异山梨酯气雾剂的含量和每揿含量，不须任何前处理，操作简便、实用，结果准确。重现性试验和回收率试验结果表明，其RSD为0.28 %，回收率为100.2 %。

表2　每揿含量结果(mg,n=2)

批号

HPLC法

部标法

1

0.557

0.575

2

0.604

0.638

3

0.576

0.603

8.2　将含量测定项下的样品放置48 h后重新测定，其含量基本不变，说明溶液稳定。

参考文献
1　卫生部标准.WS-360(X-308)-95

(本文于1997年9月16日收到)