柱切换高效液相色谱法测定头孢拉定血清浓度

(第二军医大学附属长征医院临床药理室　上海　200003)

摘要　建立一种HPLC法快速测定头孢拉定血清浓度。取全血1 mL，离心，20 μL直接进样。色谱柱：Hi-Pore Reversed Phase Column(4.6 mm×250 mm)，预柱：Bio-sil ODS-5s Cartridges，分析流动相10 %乙腈，预流动相0.9 %氯化钠，切换时间2 min，检测波长254 nm。药物保留时间7.05 min，分离良好；血清浓度2～100 μg/mL范围内线性良好，r=0.9997；回收率、日内差、日间差均较好。该法快速、准确、可行。
关键词：头孢拉定　柱切换　高效液相　血清浓度

　　头孢拉定(Cefradine,CEF)是一种可供口服、肌注、静注的头孢菌素，其对β-内酰胺酶稳定，肾毒性低，被广泛用于临床。鉴于柱切换高效液相色谱法^［1］的优点，本文建立了头孢拉定柱切换高效液相色谱法，样品不经处理，可直接进样，具有快速、简捷、方便等优点，尤适合于头孢拉定的动力学测定及血药浓度监测。
1　仪器与材料
1.1　仪器　Bio-Rad高效液相系统，1350型输液泵，1706型可变波长检测器，7125型进样阀；Version 4.2数据处理系统；TGL 16G高速离心机，CQ—50超声波振荡器。
1.2　药品和试剂　头孢拉定标准品(99.5%，上海施贵宝药厂)；头孢拉定胶囊(本院制剂室)；乙腈(色谱纯)；注射用水、生理盐水(本院制剂室)。
2　实验方法
2.1　色谱条件　色谱柱：Hi-Pore Reversed Phase Column(4.6 mm×250 mm，Bio-Rad公司)。预柱：Bio-sil ODS-5s Cartridges(Bio-Rad)。预流动相：0.9 %氯化钠，流速2 mL/min。分析流动相：10 %乙腈(V/V)，流速0.8 mL/min。切换时间2 min，检测波长254 nm。
2.2　样品处理　取全血1 mL，离心5 min，20 μL直接进样。
3　实验结果
3.1　分离效果　如图1，药物峰与杂峰均很好分离，头孢拉定与头孢氨苄的分离度大于2。以头孢拉定峰计算理论塔板数大于8000。

图1　HPLC测定头孢拉定色谱图
A.空白血清　B.口服头孢拉定志愿者血清

3.2　线性关系　精称CEF 50 mg，制成浓度为20、50、100、250、500、1000 μg/mL系列，精取上述标准液各50 μL，加入空白血清0.45 mL，混匀，20 μL进样，得到血清浓度(μg/mL)对峰高的回归方程(n=6)为：
Y＝0.1876X-0.3528　r＝0.9997
CEF在2～100 μg/mL范围内线性良好。
4　方法评价
4.1　回收率及精密度的测定　取空白血清共6份各1.0 mL，分别加入不同量的CEF标准品，配制成25、100 μg/mL血样各3份，20 μL血清进样。结果见表1。

表1　CEF回收率及精密度测定

加入量
/μg

样品数

测得量
/μg

回收率
/%

RSD
/%

25

3

24.60±0.59

98.40

2.40

100

3

99.34±3.06

99.34

3.09

4.2　日内差、日间差　配制100 μg/mL血清样品，放于冰箱中冷藏，分别于早晨九点、中午一点、晚上六点取样测定，得日内差3.09 %(n=3)，连续3日取样测定，得日间差3.16 %(n=3)。
5　方法应用
健康志愿者5名，口服CEF 500 mg，取静脉血1 mL，离心，上清液20 μL进样，得药物动力学曲线如图2。
6　讨论
6.1　与文献^［2，3］相比，本法样品不经提取直接进样，简捷，省时，用于血药浓度测定十分方便。

图2　头孢拉定药物动力学曲线

6.2　曾用30 %甲醇作分析流动相，与10 %乙腈洗脱能力相同，但药物峰拖尾严重，柱压也较高。
6.3　预流动相曾用磷酸、醋酸盐缓冲溶液，切换的系统峰很乱。用水作预流动相，系统峰很好。但药物回收率很低。研究发现药物随血清中蛋白一起被预流动相冲走。预流动相改用生理盐水，能使药物与血中的蛋白有效分离，取得很好的回收率。

参考文献
1　郭　平等.HPLC柱切换技术及其在药物分析中的应用.中国药学杂志，1995，30(4)：195
2　何振海等.高效液相法测定血清中头孢拉定浓度。中国医院药学杂志，1994，14(3)：121
3　杜迎翔等.反相HPLC法测定先锋霉素Ⅵ胶囊和片剂的含量.药学进展，1995，19(3)：166

(本文于1997年6月10日收到)

Determination of Cefradine in Human Seurm by

HPLC Column Switching Technique

Huang Chunming,Chen Wei,Zhu Caijuan,Ma Yujie and Shao Yuanfu

(Department of Clinical Pharmacology,Chang Zheng Hospital,the Second Military Medical College,Shanghai,200003)

　　Abstract:To establish a simple HPLC column switching method for measuring cefradine in human serum.Serum was directly injected into the pretreatment column of Bio-sil ODS-5s Cartridges,and was cleaned up by 0.9 % saline solution.The Hi-Pore Reversed Phase Column(4.6 mm×250 mm)was used as analytical column.The mobile phase consisted of acetonitrile-water(1∶9).The eluent was detected at 254 nm.Linear range was 2～100 μg/mL.The recovery rate was 98.4 %～99.34 %.The RSD within a day was 3.09 % and between days was 3.16 %.The method was found to be simple,quick and accurate for determination of cefradine in human serum.
　　Key words:cefradine,column switching,HPLC