高效液相色谱法测定拜阿司匹灵泡腾片中维生素C的含量

广州市药品检验所　510160

拜阿司匹灵泡腾片是德国拜耳公司生产的解热镇痛复方制剂，每片含乙酰水杨酸400 mg，维生素C 240 mg。厂附资料中维生素C含量测定采用碘量法，本文采用极性的氨基柱^［1］，以0.01 mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调pH 2.4)—乙腈(95∶5)为流动相，可成功分离维生素C与乙酰水杨酸，准确测定维生素C的含量，色谱过程可在5 min内完成，方法简便，重现性好。经与厂附资料碘量法对比，结果一致。
1　仪器与试剂
日本岛津LC—10A高效液相色谱仪；SPD—10A紫外检测器；C—R6A数据处理机。色谱柱：Spherisorb NH₂—5 μm，5 mm×200 mm(中国科学院大连化物所)；维生素C对照品含量为100.7 %；其它试剂均为分析纯。
2　线性范围和回收试验
2.1　对照品贮备液的制备　精密称取维生素C对照品500 mg，置100 mL量瓶中，加0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀。
2.2　线性试验　分别取对照品贮备液1、2、4、8、16 mL置25 mL量瓶中，用0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液稀释至刻度，浓度分别为200、400、800、1600、3200 μg/mL，摇匀。在选定的色谱条件下分别进样20 μL(流速1.5 mL/min)，记录各浓度的色谱峰面积，以浓度为X，峰面积为Y，求得回归方程为：
Y＝2432.59X+281824.50　r＝0.9999
2.3　回收试验　取已准确测定含量的样品片粉适量(约相当于维生素C 60 mg)，置50 mL量瓶中，加0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液溶解并稀释至刻度，精密量取此液4、4.5、5、5.5、6 mL置10 mL量瓶中，各精密加入对照品贮备液1 mL，用0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液稀释至刻度，按样品测定项下方法进行加样回收试验，测得平均回收率为100.4 %，RSD为0.8 %(n=5)。
3　精密度和稳定性试验
取制备好的样品溶液重复进样5次，峰面积不变，RSD为0.8 %。取同一份样品溶液分别在0、4、8 h进样测定，峰面积基本不变，RSD为0.9 %。
4　样品测定
取样品10片，精密称定，研细，精取片粉适量(约相当于维生素C 30 mg)，置25 mL量瓶中，加0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液适量，振摇使维生素C溶解，放置10 min，使泡腾片产生的气体排尽，用0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液稀释至刻度，摇匀。另取维生素C对照品用0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液制成1200 μg/mL的溶液。在选定的色谱条件下分别进样20 μL，记录对照液与样品液的色谱峰面积，用外标法计算样品中维生素C的含量，测定样品3批并与碘量法对比，结果见表1。

表1　样品含量测定结果(%)

批号

碘量法

HPLC法

XG 321

99.0

102.1

XG 531

103.1

102.4

XG 532

98.7

100.9

　　将用2种分析方法分别测得的结果进行t检验，求得t＝1.033＜t_0.025，4＝2.776，说明这2种分析方法没有显著差别。

5　讨论
5.1　维生素C极性较大，在C₁₈柱上基本不被保留，近来国外在氨基柱上分离维生素C的报道较多，本文采用氨基柱，以0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH 2.4)—乙腈(95∶5)为流动相，可使维生素C的保留时间达到2 min左右，与乙酰水杨酸(保留时间约为3.5 min)的分离度可达3.5(图1)。

图1　色谱图
1.维生素C　2.乙酰水杨酸

5.2　由于维生素C易溶于水，但如用水作溶解样品的溶剂，则维生素C峰与水的倒峰合并分不开，故选用配制流动相的水相(0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液)作溶剂，效果理想。
5.3　仅用0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液作流动相已可分离维生素C与乙酰水杨酸，加入少量乙腈可以达到更好的分离效果，经试验以0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液—乙腈之比为95∶5为最佳。
5.4　由于乙酰水杨酸微溶于水，维生素C易溶于水，且拜阿司匹灵加维C泡腾片中含有碱性泡腾成分，故能迅速完全地溶于0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液中而呈一完全澄清溶液，所以样品溶液可不经过滤而直接进样测定，只是溶解样品时应注意放置一段时间(10 min即可)，以便让泡腾剂产生的气泡除尽，再稀释定容，以免影响稀释体积。
5.5　维生素C水溶液极不稳定，尤其在碱性条件下氧化作用显著加速，经试验，维生素C在0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH 2.4)中稳定(8 h内峰面积基本不变)，可以满足测定的需要。
5.6　本法测定拜阿司匹灵泡腾片中维生素C的含量，如再做进一步的工作，还可同时测定乙酰水杨酸的含量。

参考文献
1　　胡家炽等.HPLC法同时测定感冒敏胶囊中扑热息痛、盐酸吗啉胍和维生素C.药物分析杂志，1992，12(1)：18

(本文于1997年9月18日收到)