Literature
Home药品天地专业药学实验技术色谱技术色谱论文

反相高效液相色谱法测定银翘解毒片中绿原酸和甘草酸的含量

来源:中国色谱网
摘要:(中国药科大学分析化学研究室南京210009)摘要用反相高效液相色谱法测定了银翘解毒片中绿原酸和甘草酸,此2种成分分别为该成药中主药金银花和甘草的有效成分。测定了3个批号的样品。该法也可用于金银花、甘草原药材中绿原酸、甘草酸的含量测定。关键词:银翘解毒片金银花甘草绿原酸甘草酸反相高效液相色谱法银翘解毒......

点击显示 收起

 

 
(中国药科大学 分析化学研究室 南京 210009)


摘要  用反相高效液相色谱法测定了银翘解毒片中绿原酸和甘草酸,此2种成分分别为该成药中主药金银花和甘草的有效成分。用十八烷基硅烷微粒硅胶为固定相,乙腈—水(49∶51)为流动相,非那西丁为内标,紫外检测。用溶剂选择性三角形对流动相进行了优化,对提取溶剂、提取方法、干扰因素进行了考察,并进行了线性范围、模拟样回收率和加样回收率试验。测定了3个批号的样品。该法也可用于金银花、甘草原药材中绿原酸、甘草酸的含量测定。
关键词:银翘解毒片 金银花 甘草 绿原酸 甘草酸 反相高效液相色谱法
银翘解毒片由金银花、甘草、连翘、薄荷等9味中药组成,有辛凉解表、消热解毒作用,对风热感冒、发热头痛等有较好的疗效。中国药典(1995年版一部)已收载该药,但没有含量测定要求
[1]。林黎明用差示导数光谱法测定了银翘解毒片中的总绿原酸含量[2],黄庆华等用气相色谱法测定了该药的薄荷醇和薄荷酮[3]。本文用反相高效液相色谱法测定了该药片中2味主药金银花、甘草的有效成分绿原酸和甘草酸。该法准确、可靠,重现性好。1 仪器与药品
Waters高效液相色谱仪,510高压泵,490紫外可见波长检测器,740数据处理机。
绿原酸(中国药品生物制品检定所),甘草酸(本校中医药教研室提供),非那西丁(长春制药厂),金银花、甘草、淡竹叶、桔梗、牛蒡子、淡豆豉、荆芥、薄荷、连翘、银翘解毒片(市售),经本校生药教研室鉴定,市售金银花为忍冬Lonicera japonica Thunb.的花蕾,甘草为
Glycyrrhiza uralensis Fisch.的根及根茎。甲醇、乙腈等试剂为分析纯或光谱纯,水为二次重蒸馏水。
2 色谱条件
色谱柱:
YQG C18(3.9 mm×200 mm5 μm)流动相为乙腈—水(49∶51),流速1 mL/min,柱温25 ℃,绿原酸与甘草酸检测波长分别为326、248 nm,灵敏度:0.5AUFS,非那西丁为内标,进样量10 μL。
3 流动相的选择
根据溶剂选择性三角形的概念和方法
[4],先用甲醇—水试验,当比例为60∶40时,各组分的容量因子在1~10合适范围内,说明该流动相溶剂强度合适,可计算为1.56[4],但分离情况并不满意,则可在固定流动相的溶剂强度的基础上,把甲醇换成选择性不同的组的有机溶剂,甲醇是Ⅱ组溶剂,可改用第Ⅵ组的乙腈,或第Ⅲ组的四氢呋喃,以改变流动相的选择性,其乙腈—水或四氢呋喃—水的比例可根据公式计算为49∶51或35∶65。
经试验,乙腈—水(49∶51)分离效果较满意,几种组分均能达基线分离,分析时间也较为合适,故无需进一步优化流动相,样品分离情况见图1。



图1 银翘解毒片色谱图
1.绿原酸 2.甘草酸
3.未知物 4.非那西丁(内标)

4 干扰因素考察
按银翘解毒片配方配制不含甘草的模拟样品和不含金银花的模拟样品,按“样品测定”方法测定,结果见图2,从图可见,在绿原酸及甘草酸出峰区间未出现干扰峰。



图2 模拟样品色谱图
A.不含甘草的模拟样品 B.不含金银花的模拟样品
1.绿原酸 2.甘草酸 3.未知物

5 线性范围与灵敏度
贮备液配制:精密称取绿原酸、甘草酸适量,用乙醇为溶剂,配制成1 mg/mL的溶液,作贮备液。
内标液:1 mg/mL非那西丁的乙醇溶液。
精密吸取贮备液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL,各加内标液1 mL置10 mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀后,进样10 μL,测定,同一浓度测3次,取其平均值,以标准品峰面积与内标峰面积之比为纵坐标,进样量(μg)为横坐标回归,绿原酸、甘草酸回归方程分别为:
A=0.0141+0.639X r=0.9999
A=0.00795+0.728X r=0.9998
线性范围均为0.20~1.2 μg,检测限分别为0.8、1.0 ng。
6 回收率测定
6.1 模拟样品回收率 将市售药材粉碎后,按处方制作银翘解毒片模拟样品。按照样品测定项下的提取处理方法测定,结果绿原酸、甘草酸平均回收率分别为97.7 %、96.9 %,RSD分别为1.4 %、1.7 %,n=5。
上述模拟样品所用金银花、甘草药材,粉碎后各称一定量粉末,用无水乙醇回流提取,经过滤后进样测定,绿原酸含量为2.70 %(n=3),甘草酸为2.62 %(n=3)。
6.2 加样回收率 精密称取绿原酸、甘草酸各约0.5 mg,置银翘解毒片粉末0.5 g中混匀,按样品测定项下的方法回流提取、测定,结果绿原酸、甘草酸平均回收率分别为100.5 %、98.0 %,RSD分别为1.1 %、1.7 %,n=5。
7 重现性考察
选用绿原酸标准液,每次进样10 μL,日内每隔30 min测1次,日间每隔1 d测1次。结果日内和日间峰面积的RSD(n=7)分别为0.46 %和2.4 %。
8 样品测定
取市售银翘解毒片20片,去糖衣研磨,精密称定,计算平均片重。精密称取样品粉末约1g,先以20 mL氯仿回流提取,弃去氯仿液,再用无水乙醇20 mL回流提取,重复3次,合并提取液,浓缩,过滤,加内标液1 mL,用流动相定容至10 mL量瓶中,进样,测定结果见表1。

表1 银翘解毒片中绿原酸、甘草酸
含量测定结果(n=4)


批号

绿原酸

甘草酸

含量/(mg/g)

RSD/%

含量/(mg/g)

RSD/%

1

0.583

0.62

0.285

0.61

2

0.613

1.1

0.300

1.1

3

0.567

2.4

0.278

2.0

9 讨论


分别用无水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮作为提取溶剂,结果无水乙醇可将绿原酸和甘草酸提取完全,但提取液组分太多,以致于难以分离完全。根据绿原酸和甘草酸在氯仿中几乎不溶,先用氯仿提取,除去极性较小的组分,然后再用乙醇提取,其他组分较少,分离效果好。
对提取方法进行了水浴回流、超声波及沙氏提取3种方法的比较,结果表明,水浴回流效果最佳。
本文方法可用于评价银翘解毒片的质量,也可用于金银花、甘草原药材中绿原酸、甘草酸的含量测定。

参考文献
1  中国药典.1995.一部:595
2  黄庆华等.气相色谱法测定银翘解毒颗粒中的薄荷醇和薄荷酮.广东医药学院学报,1994,10(2):90
3  林黎明.差示导数光谱法测定金银花及银翘解毒片中总绿原酸的含量.中国中药杂志,1991,16(5):282
4  倪坤仪主编.现代色谱分析.中国药科大学,1995.190

(本文于1997年5月13日收到)

The Studies on Separation and Determination of Chlorogenic Acid

and Glycyrrhetic Acid in Yin Qiao Jie Du Tablets by RP-HPLC

Ni Kunyi,Han Nanyin,Tu Jie and Chen Guanxi
(China Pharmaceutical University,Nanjing,210009)


  Abstract:In this paper a RP-HPLC method was developed to separate and determine chlorogenic acid and glycyrrhetic acid in Yin Qiao Jie Du tablets.They were separated and determined on YQG C18 co-
lumn(3.9 mm×200 mm,5
μm),using acetonitrile-water(4951)as mobile phase,phenacetin as internal standard,UV detector,flow rate 1 mL/min.
  Selection of extracting solvent,determination of linearity range and check of interference factors have been made.The accuracy of the method was checked by recoveries.
  Key words:Yin Qiao Jie Du tablets,Flos Lonicerae,Radix Glycyrrhizae,chlorogenic acid,glycyrrhetic acid,RP-HPLC

 

作者: 倪坤仪韩南银屠洁程光 2007-5-18
医学百科App—中西医基础知识学习工具
  • 相关内容
  • 近期更新
  • 热文榜
  • 医学百科App—健康测试工具