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HPLC测定妇舒液中黄芩苷含量

来源:中国色谱网
摘要:摘要目的:采用HPLC测定妇舒液中黄芩苷含量,以控制该制剂的质量。方法:用十八烷基键合硅胶柱分离黄芩苷,流动相为甲醇-4g。结果:黄芩苷峰与对硝基苯酚峰的分离度为4。理论塔板数以黄芩苷峰计算为3800。...

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摘要 

目的:采用HPLC测定妇舒液中黄芩苷含量,以控制该制剂的质量。

方法:用十八烷基键合硅胶柱分离黄芩苷,流动相为甲醇-4g.L-1磷酸(50∶50);检测波长278nm。

结果:黄芩苷峰与对硝基苯酚峰的分离度为4.5;理论塔板数以黄芩苷峰计算为3800;线性范围20~900ng(r=0.999 9);平均回收率为99.88%,RSD=1.54%(n=5)。

结论:本法简便、快速,适用于该产品质量分析检验

 

Determination of baicalin in Fushuye by HPLC

Wang Yonglin (Wang YL),Lan Yanyu (Lan YY),Zhou Baozhu (Zhou BZ) (Department of Pharmacy,Guiyang Medical College,Guiyang550004)

  ABSTRACT OBJECTIVE:To domminate the quality of Fushuye,the contents of baicalin in Fushuye was determined by HPLC.METHOD:Baicalin was separated on Spherisorb C18 column and detected at 278 nm,by using methanol-4g.L-1 phosphoric acid (50∶50) as mobile phase.RESULTS:The resolution was 4.5.The number of theoretical plates calculaled for baicalin peak was 3800.The standard curve was linear over the range of 20 ng~900ng,with the correlation coefficient 0.999 9.The average recovery was 99.88% with RSD=1.54%(n=5). CONCLUSION:The method is simple and fast,and can be used for quantitative analysis of Fushuye.

  KEY WORDS Fushuye,baicalin,HPLC

  妇舒液系由黄芩、蛇床子、五倍子等中药经提取加工制成的溶液剂,具有清热解毒,除湿止带的功能。临床用于治疗妇女湿热下注之带下而出现的带下色黄,味臭,阴痒等症。药理试验研究表明,黄芩苷是妇舒液中的主要有效成分。本实验采用HPLC对妇舒液中的黄芩苷含量测定方法进行了实验研究,结果表明,该法操作简便、快速、重现性好,可用于妇舒液的质量控制。

1 仪器与试药

  LC-5A高效液相色谱仪,SPD-6AV紫外检测器,C-R6A色谱数据处理机(日本岛津)。甲醇(色谱醇)、磷酸(分析醇)、对硝基苯酚(分析醇)、黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用)。

2 方法与结果

2.1 内标溶液的制备
精密称取对硝基苯酚适量,加少量乙醇溶解后,加水稀释成每1ml含2.5mg的溶液,即为内标溶液。

2.2 对照品溶液的制备
精密称取在60℃真空干燥4h的黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液;准确吸取该溶液100μl,内标溶液10μl,加水稀释至1ml,即为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备
准确吸取样品原液10μl,内标溶液100μl,加水稀释至10ml,即为供试品溶液。同法制备不含黄芩药材的阴性样品溶液。

2.4 色谱条件
色谱柱为十八烷基键合硅胶(Spherisorb C185μm)250mm×4.6mm;流动相:甲醇-4g.L-1磷酸(50∶50);流速:0.8ml*min-1;柱温:室温;检测波长:278nm(黄芩苷的最大吸收波长[1]。对硝基苯酚的最大吸收波长为318nm,但在278nm仍能检测,并服从朗泊比尔定律)。

2.5 系统适用性试验
分别取对照品溶液、黄芩苷及内标物对照品溶液、不加内标物的供试品溶液、阴性供试液、加内标物的供试品溶液等注入色谱仪,记录色谱(图1)。从图中可见,阴性样品图谱在黄芩苷峰位置处无假阳性峰。在不含内标物的供试品溶液色谱图中,在与内标物质峰相应的位置处无杂质峰,即本试液条件下黄芩苷峰与其它组分完全分离,内标物也不与其它组分峰重叠,柱效以黄芩苷峰计算为3800,保留时间约为9min,黄芩苷与对硝基苯酚的分离度为4.5。

图1 妇舒液中黄芩苷HPLC图
A-黄芩苷对照品;B-黄芩苷及内标物对照品;C-供试品;D-阴性样品;1-黄芩苷峰;2-内标物峰

2.6 线性关系考察
精密吸取黄芩苷对照品溶液(0.18mg.ml-1)10,50,100,200,300,500μl分别置5ml具塞刻度管中,分别准确加入内标溶液(2.5mg.ml-1)10μl,加水稀释至1ml,混匀后进样,按上述色谱条件测定峰面积,以重量比(W/W)对峰面积比(A/A)进行线性回归,回归方程为:W/W=0.500768×A/A-0.009679,r=0.9999;当拟合成完全过原点的直线方程时,回归方程为:W/W=0.49731×A/A,r=0.9999;以一供试液分析所得峰面积分别代入两方程计算含量,所得结果的相对平均偏差为0.075%,由此可看出截距近似为零,故可采用内标一点法计算含量。线性范围20ng~900ng。

2.7 精密度试验
取一供试品按供试品溶液的制备方法制备供试液,重复进样5次,记录色谱,RSD为0.50%。

2.8 重现性试验
取一供试品按供试品溶液的制备方法制备5份供试液,分别进样,记录色谱,RSD为1.35%。

2.9 回收率试验
采用加样回收,精密称取已测定含量的同一样品9份,加内标溶液,再分别精密加入黄芩苷对照品适量,按供试品溶液的制备方法制备供试液,进样,记录色谱,计算回收率。平均回收率为99.88%,RSD为1.54%。

2.10 样品测定
按供试品溶液的制备方法制备供试液及对照品溶液,分别进样5~10μl,记录色谱,测定峰面积,计算含量。5批样品中黄芩苷含量测定结果见表1。

表1 5批样品含量测定结果.n=3

批号含量/mlRSD/%
9608163.160.87
9610223.050.65
9610293.211.24
9701062.930.91
9703142.870.66

3 讨 论

3.1 在参考文献[2~3]及试验研究的基础上,以对硝基苯酚为内标物质,建立了一种不需对样品进行繁杂前处理的测定方法,在准确吸取样品液、内标液后,其它步骤可不要求准确量取,稀释及进样等均不影响测定结果。本法操作简便、快速、灵敏、专属、可靠。

3.2 经稳定性试验考察,样品溶液在室温(25℃)下放置,每隔2h测定1次,5次测定的结果RSD为0.96%。说明样品液中黄芩苷含量在10h内稳定。

3.3 黄芩药材主要含黄酮类化合物(黄芩苷元、黄芩苷[4]),其中黄芩苷含量较高,文献报道不同产地及品种含量差异较大[5],鉴于大生产中的原料受产地、来源、品种等因素的影响,使测定结果产生较大的差异,故对黄芩药材中黄芩苷的含量作了限度规定,制剂中黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计,不得少于2.80%。

3.4 在黄芩药材中黄芩苷含量测定时发现,乙醇浓度大于85%时,一次提取率仅为90%左右,用50%~70%的乙醇一次提取率可达99.5%,说明黄芩药材中黄芩苷的含量测定不宜用高浓度乙醇提取。

作者单位:王永林 兰燕宇 周宝珠 (贵阳550004贵阳医学院药学系)

参考文献
[1] 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京:中国医药科技出版社,1994:106.
[2] 袁俊贤,邵依囡,许培竖.黄芩中黄芩甙与黄芩甙元的HPLC测定法.中成药,1993,15(1):21.
[3] 黄惠云,杨晓红,李晓红.高效液相色谱法测定丹黄口服液中三种有效成分.中国药学杂志,1991,26(5):291.
[4] 张永煜,郭允珍.黄芩化学成分研究.沈阳药学院学报,1991,8(2):137.
[5] 阴健,郭力弓.中药现代研究与临床应用(1).北京:北京学苑出版社,1993:610.

(收稿:1997-12-05)

作者: 王永林兰燕宇周宝珠 2007-5-18
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