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摘要 用高效液相色谱法测定了含服替硝唑含片后人唾液中替硝唑含量，
用高氯酸沉淀蛋白质后，直接在ODS柱上测定，紫外检测波长317nm，流动
相为甲醇—水—冰醋酸(25∶75∶0.1)，方法回收率在99％以上，最小检测
限为0.10mg/L；该方法简便、快速、准确。
关键词：替硝唑 高效液相色谱法
替硝唑(Tinidazole,TNZ)是继甲硝唑后新一代的抗厌氧菌和抗滴虫新
药，目前国内正在研制开发多种剂型，可广泛应用于临床各种厌氧菌感染。
牙周炎、冠周炎等口腔疾病中厌氧菌的感染率相当高［1］，小剂量的替硝
唑含片具有用量少、副作用小等特点，有文献报道用高效液相色谱法测定血
液或制剂中替硝唑浓度［2，3］，但服用替硝唑含片后唾液中替硝唑浓度的
测定未见报道。本文用高效液相色谱法测定唾液中替硝唑的浓度。
1 药品与仪器
LC—6A高效液相色谱仪(岛津公司)；SPD—6AV紫外分光光度检测器；
CR—4A数据处理机；甲醇，优级纯(上海吴泾化工厂)；替硝唑(TNZ)对照品
(浙江可立思安制药有限公司提供，纯度99.5％)；替硝唑含片(由本系药剂
教研室提供，5mg/片)。
2 实验结果
2.1 色谱条件 色谱柱为Shim-Pack CLC ODS(6.0mm×160mm)，流动相
为甲醇—水—冰醋酸(25∶75∶0.1)，流速0.8mL/min，柱温为室温；检测
波长317nm，检测灵敏度为0.02AUFS，进样量10μL。
2.2 标准曲线制作 准确称取干燥至恒重的TNZ对照品0.1541g，用二次
蒸馏水溶解，配成1.541g/L标准品储备液，存于冰箱中，用前稀释至适当
浓度，即为TNZ标准溶液。取空白唾液8份，每份0.5mL，分别加入TNZ储备
液或TNZ标准溶液适量，使唾液中TNZ浓度分别为0、3.022、8.723、30.22、
73.38、114.1、165.1、298.3mg/L，各加入0.8mol/L的高氯酸2mL，振荡
1min后，在3000r/min离心30min，取上清液直接进样，记录色谱图，见图
1—A、B。可见空白唾液不干扰TNZ的测定，以峰面积对唾液中TNZ浓度作线
性回归，得线性方程(n=8)为：
C＝1.317+0.001144A r＝0.9999
图1 空白唾液(A)与唾液中TNZ(B)色谱图
1.TNZ
2.3 回收率试验
按标准曲线测定结果，计算各浓度下的回收率，结果见表1。
表1 回收率测定结果(n=3)
| 浓度(mg/L) | 回收率(％) | SD |
| 3.022 | 138.7 | 7.64 |
| 8.723 | 105.0 | 2.33 |
| 30.22 | 99.06 | 1.31 |
| 73.38 | 101.1 | 0.99 |
| 114.1 | 100.6 | 0.85 |
| 165.1 | 101.2 | 0.21 |
| 298.3 | 101.2 | 0.41 |
2.4 日内和日间精密度试验 在0.5mL唾液中加入15.41mg/L的TNZ标准液
100μL，分别在同一日和不同日间进行处理后进行HPLC测定，结果其日内
RSD＝4.8％，n=3；日间RSD＝1.95％，n=32.5 最小检测限试验 在0.5mL
唾液中加入不同稀释倍数的TNZ标准溶液，同上处理后，进样分析，直至样
品峰高为基线噪音的2倍，测得在唾液中其最小检测限为0.10mg/L。
2.6 样品测定 健康志愿者4人，饭后1h将5mg/片的替硝唑含片1片放入口
中，自然含化，在含片含化前禁水，1h后可随意饮水，放入口中立即及每间
隔5min取唾液0.5mL同上处理后测定TNZ含量，含片在口腔中完全含化时间为
15～40min，平均为(30±10.1)min，测定结果见表2。
3 讨论
3.1
用反相高效液相色谱法测定替硝唑含片在唾液中浓度，回收率高，最
小检测限为0.10mg/L，样品预处理简便，唾液中成分对替硝唑不干扰，方法
简便可靠，适用于唾液中替硝唑浓度测定。
3.2 唾液中替硝唑浓度监测结果表明，含服5mg/片的替硝唑含片1片，在0.1min
以内即可达到最大并在含片完全含化以后2h之内，唾液中替硝唑浓度仍保持
在0.2mg/mL以上，为临床应用替硝唑含片治疗牙周炎及其它口腔厌氧菌感染
提供依据。
表2 替硝唑含片在唾液中的浓度(n=4)
| 含化时间 (min) | 浓度 (mg/L) | RSD (％) |
0.1 | 280.3 | 22.7 |
| 5 | 286.8 | 30.7 |
| 10 | 207.9 | 18.2 |
| 15 | 244.1 | 31.5 |
| 20 | 153.9 | 7.47 |
| 25 | 163.2 | 55.6 |
| 30 | 135.5 | 61.2 |
| 35 | 71.50 | 78.9 |
| 40 | 30.52 | 66.2 |
| 45 | 17.21 | 86.6 |
| 50 | 15.14 | 30.0 |
| 55 | 9.034 | 75.3 |
| 60 | 5.91 | 66.7 |
| 70 | 3.96 | 67.4 |
| 80 | 1.49 | 36.9 |
| 90 | 0.50 | 2.00 |
| 100 | 0.63 | 39.7 |
| 120 | 0.21 | 52.4 |
| 160 | 0.26 | 76.9 |
参考文献
1 陈少菲等.替硝唑抗厌氧菌作用的研究.浙江医科大学学报，1994，23(4)：160
2 Hackett L P.Determination of metronidazole
and tinidazole in human plasma using high
performance liquid chromatography.J Chromatogr,1979,175:347
3 李士敏等.替硝唑输液中替硝唑含量的测定.现代应用药学，1996，13(4)：46
Determination of Tinidazole in Saliva by HPLCafter Administration of TNZ
Li Shimin and Hu Fuqiang
(Department of Pharmacy,Zhejiang Medical University,Hangzhou,310006)
Yu Ying
(Hangzhou Education College,Hangzhou,310004)
Abstract:The concentration of
tinidazole(TNZ)in saliva was determined after administration
of TNZ by RP-HPLC.The saliva was treated with 0.8mol/L HClO4 and the supernatant
liquid was injected,the TNZ was quantified with UV detector at 317nm,and the mobile phase
was MeOH-H2O-HAc(25∶75∶0.1).The recovery was above 99％，the detection limit
was 0.10mg/L,and the linear range was 0.1～370mg/L.The method was simple.
Key words:tinidazole(TNZ),HPL