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提要 用HPLC方法对中药复方制剂清经胶囊中小檗碱进行含量测定,并进行了方法的广泛适应性试验,结果表明小檗碱在0.115~0.575
μg范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系,方法回收率为98%。精密度与准确度均较满意。该法可有效地控制其内在质量。 DETERMINATION OF
BERBERINE IN QINGJING Yu Ping Hu Ping He
Qiang ABSTRACT This paper described the content determination on berberine within
Qingjing capsules of traditional medicine compounds by HPLC method, which also carried out
a adaptability test in a wide-ranging.The results showed that within 0.115~0.575 μg, berberine kept a
fine line relationship between concentration and peak area. The average recovery rate in
sample was about 98%. The precision and accuration were both satisfactory, and the method
can control quality effectively. 清经胶囊是由牡丹皮、黄柏等数味中药材研制而成的中药复方制剂。具有清热凉血、滋肾养阴、调经止痛等功效。为制定本品质量控制标准,对其中小檗碱的含量测定方法进行了研究。该法回收率高、分离度好、方法简便、适应性好,适于清经胶囊生产的质量控制。 Fig 1 High performance liquid chromatogram
of berberine 1.2.3 标准曲线的绘制 分别吸取对照溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5
μl注入色谱仪。以峰面积积分值对进样浓度进行回归,得回归方程C=0.0001944A+0.003827,r=0.9998(式中C为盐酸小檗碱的量μg,A为峰面积积分值)。可见,进样量在0.115~0.575
μg范围内线性关系良好,标准曲线基本过原点。故在实际含量测定中,可采取随行标准法(中国药典1995年版一部附录VID)计算供试品小檗碱的含量。 Table 1 Results for determination by different extracting solvents(n=3) |
Solvent | Berberine content(mg/g) | ||
MeOH | 4.21 | 4.29 | 4.17 |
MeOH-HCl(100∶1) | 7.28 | 7.41 | 7.39 |
Mobile phase | 6.40 | 6.40 | 6.52 |
根据上述试验结果,选用酸性甲醇[甲醇-盐酸(100∶1)]作为溶剂制备供试品液,超声提取不同时间后依上法测定,结果见表2。 Table 2 Results for determination by different extracting time (n=3) |
Time (min) | Berberine content(mg/g) | ||
5 | 7.35 | 7.10 | 7.17 |
15 | 7.15 | 7.28 | 7.16 |
30 | 7.25 | 7.17 | 7.20 |
45 | 7.10 | 7.17 | 7.17 |
试验表明:超声提取5~45 min含量测定结果无明显差异。为确保小檗碱提取完全并缩短分析时间,供试品中其含量测定的提取条件以酸性甲醇作溶剂,超声提取15
min为佳。 1.2.5 进样精密度及方法精密度试验 以同一对照品溶液,重复进样5次,每次10 μl,测得小檗碱对照品峰面积,其RSD为0.79%。按“1.2.4”方法测定同一批供试品的含量,RSD为0.97%,试验结果表明精密度良好。 1.2.6 空白和供试品回收试验 分别称取5份空白样品约0.1 g,各加入盐酸小檗碱对照品适量,按“1.2.4”方法测定,结果见表3。 Table 3 Recovery of blank |
No. | Weight(g) | Amount | Recovery (%) | Average recovery (%) | RSD (%) | ||
content (mg) | added (mg) | measured (mg) | |||||
1 | 0.0851 | 0 | 0.7350 | 0.7339 | 100 | ||
2 | 0.0971 | 0 | 0.7350 | 0.7197 | 98 | ||
3 | 0.1100 | 0 | 0.7350 | 0.7195 | 98 | 99 | 0.91 |
4 | 0.0928 | 0 | 0.7350 | 0.7299 | 99 | ||
5 | 0.1274 | 0 | 0.7350 | 0.7215 | 98 |
取供试品约0.1 g,加入盐酸小檗碱对照品适量,按“1.2.4”方法测定,结果见表4。 Table 4 Recovery of samples |
No. | Weight (g) | Amount | Recovery (%) | RSD (%) | |||
content (mg) | added (mg) | measured (mg) | |||||
1 | 0.0931 | 0.6908 | 0.8000 | 1.4934 | 100 | ||
2 | 0.1015 | 0.7531 | 0.8000 | 1.5380 | 98 | 98 | 2.0 |
3 | 0.0975 | 0.7234 | 0.8000 | 1.4877 | 96 | ||
4 | 0.0900 | 0.6678 | 0.3200 | 0.9805 | 98 | ||
5 | 0.0923 | 0.6849 | 0.3200 | 0.9953 | 97 | 98 | 1.0 |
6 | 0.1102 | 0.8177 | 0.3200 | 1.1358 | 99 |
1.2.7 供试品的测定 取3批供试品,依“1.2.4”方法测定,结果见表5。 Table 5 The content of different samples |
Batch No. | Amounts (mg/g) | Average (mg/g) | RSD(%) | ||
980101 | 3.22 | 3.17 | 3.24 | 3.21 | 1.12 |
980102 | 3.40 | 3.43 | 3.48 | 3.44 | 1.81 |
980103 | 3.40 | 3.44 | 3.42 | 3.42 | 1.18 |
1.3 方法适应性试验 1.3.1 色谱仪考察 两台不同高效液相色谱仪(HP1100型和Waster515型,其它色谱条件不变)按拟定方法测定同一供试品溶液中小檗碱的含量(n=6),试验结果表明仪器与仪器之间无显著性差异。 1.3.2 色谱柱考察 其它色谱条件不变,对不同的ODS色谱柱按“1.2.4”方法进行色谱分析,均得到供试品主要成分基线分离的对称色谱峰形,保留时间9~18 min(依色谱柱不同而异),空白对照品(缺黄柏)无干扰,小檗碱色谱峰与巴马汀能够达到基线分离。试验结果表明,该方法广泛适应性良好。 2 讨论 2.1 曾以乙腈-0.1 mol/L醋酸铵(35∶65,磷酸调pH6.0);醋酸乙酯-乙醇-甲醇(75∶20∶5)作流动相,结果均不理想。盐酸小檗碱色谱峰与杂质峰不能达到很好的基线分离。 2.2 不同日期制备的小檗碱对照溶液,以最新配制的对照溶液为对照,在同一色谱条件下测定盐酸小檗碱的含量,结果表明该对照溶液在冰箱中保存一个月左右其浓度基本无变化。
*成都铁路中心医院 610083 参考文献 1 日本药局方.JPⅩⅡ.1991 |