高效液相色谱法测定啤酒花及其制品中的α-酸、β-酸和异α-酸

1　引　　言
　　α-酸、β-酸及异α-酸是啤酒苦味酸的主要成分，它们的分析是啤酒花及其制品质量评价及控制的主要内容，国内主要使用光度法和电导滴定法分析，这两种方法因存在许多问题而影响测定结果，因此，国外近年已逐渐用高效液相色谱法（HPLC）分析啤酒、啤酒花及各种啤酒花制品的α-酸、β-酸及异α-酸。我们在研究啤酒花制品时需要同时分析α-酸、β-酸及异α-酸，但是已有的HPLC法仅可以同时测定α-酸和β-酸，而异α-酸是单独分析的，只有在梯度洗脱和较高的柱温时可以同时测定三者，这就限制了它的推广应用。本文建立了室温下同时测定它们的反相高效液相色谱法，可用于分析各种啤酒花制品。

2　实验部分
2.1　仪器与试剂　HYPERSIL高效液相色谱仪，配用UV-100紫外检测器(大连伊力特科学仪器有限公司)。α-酸、β-酸及异α-酸的标准品按文献自制，经多次重结晶，熔点与文献值吻合后备用。甲醇为优级纯，乙醚、HCl 、H3PO4均为国产分析纯试剂，实验用水为去离子重蒸水。
2．2　样品制备　（1） 啤酒花及颗粒　准确称取10 g粉碎样品，置于250 mL具塞锥形瓶中，加20 mL 甲醇，100 mL乙醚充分震荡30 min，再加入40 mL 0.1N HCl 继续震荡10 min，静止10 min，取5 mL上层乙醚液于50 mL容量瓶，甲醇定容，进样前用0.45 μm膜过滤。（2）啤酒花浸膏及异构化浸膏　样品先加热40℃均化，准确称取0.5 g，用10 mL甲醇溶解后定容至50 mL容量瓶，取5 mL于50 mL容量瓶，甲醇定容，进样前用0.45 μm膜过滤。
2.3　色谱条件　色谱柱：HYPERSIL ODS-2 （C18） 4.5　μm 150×4.6　mm(大连伊力特科学仪器有限公司)，流动相：甲醇∶水（85∶15，V／V），H3PO4调pH 3.0～3.5，流速：1.0 mL/min，柱温为室温，检测波长314　nm，进样量10　μL，峰面积外标法定量。

3　结果与讨论
3. 1　检测波长的选择　 α-酸、β-酸和异α-酸在弱酸性条件下的最大紫外吸收波长分别是320、279、340 nm，为了使它们都有最大响应，现有方法有选择314　nm和280　nm, 我们发现在314　nm时，可以同时兼顾3种被测物都有较好的吸光度。因此，选用314 nm作为α-酸、β-酸和异α-酸的检测波长。
3.2　回归分析、检出限、精密度及回收率　异α-酸在0.05～3.5　g/L、α-酸、β-酸在0.01～5.0 g/L浓度范围内，浓度X与峰面积Y呈良好线性关系，回归方程分别为Y=4.58×105X－3.46×104，Y=3.10×106X－2.37×104 , Y=2.50×106X－9.50×104。相关系数分别为0.9995，0.9998，0.9999。检出限分别为2.7、8.1、13.5　g/L。相对标准偏差为0.91%、0.73%、0.87%。回收率分别为95.8%、100.5%、102.1%。
3.3分析实例　　（1）取异构化浸膏样品适量，按前述的样品制备方法进行处理。其结果：异α-酸、α-酸、β-酸的含量分别为79.87%、2.27%和1.40%。（2）酒花浸膏的含量为：α-酸44.05%、β-酸41.68%。（3）酒花颗粒的含量为：α-酸6.44%、β-酸5.96%。

本文系国家计委资助重点科技攻关课题
作者单位：赵素华（大连理工大学精细化工国家重点实验室，大连116012）
　　　　　杨锦宗（大连理工大学精细化工国家重点实验室，大连116012）
　　　　　刘奎钫（新疆大学化学系，乌鲁木齐830046）
　　　　　张凌怡（新疆大学化学系，乌鲁木齐830046）
　　　　　李燕萍（新疆大学化学系，乌鲁木齐830046）