高效液相色谱法分离和蒸发光散射检测测定食品中的糖

糖的分析采用最多的是高效液相色谱法(HPLC)。其中氮基柱对糖有较高的分离效率，但由于自身的水解和固定相上的氨基与糖的碳基之间易形成希夫碱，缩短了其使用寿命。在流动相里加入某些胺作为改善剂，可以动态修饰硅胶柱或C18柱，得到与化学键合氨基柱柱效相当的动态修饰柱，且由于柱上吸附的有机胺不断得到更新，分析柱可以长时间保持稳定。糖本身在通常的紫外区无吸收，采用低波长紫外检测干拢较大。对糖的直接检测往往是利用示差折光检测器(RID)来进行，但RID灵敏度较低且不能用于梯度洗脱。衍生法可以很大程度提高对糖的检测灵敏度，但衍生化操作繁琐且不可避免地会引入误差。蒸发光散射检测器(ELSD）可以直接对糖进行检测，且具有较高的灵敏度，本文利用乙二胺动态修饰硅胶柱和蒸发光散射检测器 建立了一种可靠的直接测定果汁中糖的HPLC／ELSD法。 实验仪器为HP1100高效液相色谱仪：配有四元梯度泵、二极管阵列检测器(DAD)和化学工作站，另配有Alltech 500 ELSD（美国Alltech公司）。乙腈(色谱纯)。水为去离子水使用前经0.45μm的滤膜过滤。食品(果汁、葡萄酒、白酒)从市场购买。色谱柱为Zorbax Rx-SIL(250mm x 4．6mmID，5μm)（Hewlett—Packard），使用同样填料的保护柱(12.5m m × 4．6m m ID，5μm)。先用含0.3％(V／V)乙二胺的乙腈--水(2.6：1，V／V)溶液200mL冲洗色谱柱，再以含0．03%（V／V）乙二胺的乙腈—水(2.6：1，V／V)作为波动相。流速 1mL／min，柱温：25℃；进样量：20μL，ELSD参数：漂移管温度为85℃，氮气流速为2．0L/min 食品样品用0.45μm的滤膜过滤 滤液用水稀释30倍后直接进样。 流动相中水的含量对糖的保留影响较大，采用乙腈—水(2.6：1，V／V)作为流动相，六种糖可以在适当的时间内得到较好的分离。乙二胺动态修饰硅胶柱分离糖的机理在于它一端的氨基可以与硅胶表面的硅醇基形成氢键而吸附在硅胶表面，形成一个动态的氨基柱其另一端的氨基与糖形成氢键使糖在柱上保留。先用含O，03%（V／V）乙二胺的溶液200mL冲洗色谱柱，以保证硅胶表面完全由吸附的乙二胺覆盖，再采用含较低浓度(O，03％，V／V)的乙二胺溶液作为流动相。许多实验表明，ELSD的响应值与被测物浓度的关系比较复杂。使用本文的色谱条件时，浓度为50—2000mg／L范围内，将六种糖的浓度与ELSD测得的峰面积分别取对数后进行拟合。可得良好的线性关系(R＝0.994—O．999)。六种糖的检测限(S／N＝3)分别为：果糖10mg／L、葡萄糖20mg／L、蔗糖10mg／L、麦芽糖20mg／L、乳糖50mg／L、棉籽糖10mg／L。本法应用于纯果汁(苯果汁、菠萝汁、橙汁)以及葡萄酒、白酒中糖的分折，所分析的食品中均只含有果糖、葡萄糖、蔗糖。