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1 仪器与试药
日本岛津LC-6A高效液相色谱系统，SPD-6AV紫外检测器；SCL-6A系统控制器；CTO-6A恒温箱；CR-3A数据处理机。
甘草酸对照品购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用)；牛黄清心丸由天津达仁堂制药厂提供。乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 色谱条件
ODS-5分析柱(4.6 mm×150 mm)，流动相：0.05
mol/L KH2PO4(pH=2.5)-MeCN(21∶10)，检测波长：254 nm，流速：1.0
mL/min，柱温：40℃，进样量：均为10 μL,纸速：2 mm/min。
3 方法与结果
3.1 线性关系试验：精密称取甘草酸适量，用50%乙醇制成0.188
mg/mL溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述溶液3、5、7、9、11 μL，按上述色谱条件依次进样分析、测定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，得回归方程Y=-1.1×102+1.32×102X，
r=0.9999。线性范围0.564～2.068 μg。
3.2 精密度试验：精密吸取对照品溶液5 μL,重复进样5次，测定结果RSD=0.76%。表明仪器精密度较好。
3.3 样品测定：取样品40粒，剪碎，混匀，精称2.0 g于10 mL离心管中，加50%乙醇至刻度，超声波提取15
min，离心(转速为3 000 r/min)。取上清液，残渣用50%乙醇再提取2次，合并上清液于50
mL容量瓶中，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10
μL进样，照上述色谱条件测定，用外标一点法计算，结果见表1。
表1 牛黄清心水蜜丸中甘草酸含量测定结果(n=3)
| 批号 |
970601 |
970602 |
970603 |
| 甘草酸含量 |
0.283 |
0.294 |
0.266 |
| RSD(%) |
1.27 |
1.19 |
1.15 |
3.4 稳定性试验：取样品溶液(批号970501)，在0、1、2、3、4、5
h分别进样10 μL，记录峰面积，结果6次进样峰面积的RSD为1.99%。说明供试品溶液的吸收面积在5
h内基本无变化，较稳定。
3.5 重复性试验：取同一批样品，精密称取6份，按样品含量测定方法提取、测定、计算。平均含量为0.290%，RSD为1.19%。
3.6 加样回收率试验：取同批甘草酸含量为0.280%的样品，剪碎，混匀，精密称取5份各1.0
g，各精密加入0.56 mg/mL的甘草酸对照品溶液5 mL，均依样品测定项下方法操作，计算回收率为98.82%，RSD为1.12%。
3.7 牛黄清心丸空白试验：照上述色谱条件测定牛黄清心丸空白样品(不含甘草的牛黄清心丸样品)与甘草酸对照品液测定结果相比较，在甘草酸出峰位置处无其他干扰。
4 小结与讨论
4.1 波长的选择：文献［4～6］报道甘草酸的检测波长有238、248、280
nm不等。本文应用紫外分光光度计测定甘草酸的紫外吸收光谱图，在254
nm处有最大吸收，故选择254 nm为检测波长。
4.2 流动相的选择：牛黄清心丸为中药大复方制剂，药味复杂。实验中考察了多种流动相，发现提高流动相的酸性可以改善样品峰的峰形及分离度，又考虑pH太低不利于色谱柱的保养，故加入0.05
mol/L KH2PO4缓冲液。结果表明，本文流动相采用0.05
mol/L KH2PO4(pH=2.5)-MeCN(21∶10)可排除处方中共存的药材和杂质的干扰，甘草酸峰形良好，与杂质峰达基线分离。
4.3 缓冲液的配制：精称6.8 g KH2PO4，置1 000mL容量瓶中，加入2mL磷酸，用水稀释至刻度，摇匀，即得0.05mol/L
KH2PO4(pH=2.5)的缓冲液，该缓冲液必须现用现配。
参考文献
1 石力夫，等.中草药，1993，24(6)：296
2 毛丽珍，等.中成药，1992，14(8)：18
3 任家礼，等.中草药，1990，21(1)：18
4 王 荣，等.中国药学杂志，1996，31(9)：548
5 朱维华.药物分析杂志，1994，14(5)：47
6 崔铉玖，等.药物分析杂志，1996，16(5)：323 |
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作者：
杜海燕徐晓阳金兆祥杜克文何跃华罗辉宋如松 2007-5-18