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(长 沙 410003 中 国 人 民 解 放 军 163中 心 医 院 药 剂 科 )
| 摘 要 目 的 ： 建 立 同 时 测 定 复 方 替 硝 唑 栓 中 替 硝 唑 、 醋 酸 氯 己 定 、 克 霉 唑 含 量 的 HPLC方 法 ， 为 该 制 剂 的 质 量 控 制 提 供 依 据 。 方 法 ： 样 品 经 无 水 乙 醇 提 取 ， 蒸 馏 水 过 滤 ， 续 滤 液 稀 释 后 进 样 20μ l。 色 谱 条 件 ： Symmetry C8柱 ， 流 动 相 为 甲 醇 ： 水 (45∶ 55， H3PO4调 pH为 2.50)， 流 速 为 1ml/min,检 测 波 长 为 260nm。 结 果 ： 各 组 分 具 有 良 好 的 线 性 和 分 离 度 ， 平 均 回 收 率 (％ )? RSD(％ )为 ： 替 硝 唑 (102.89? 1.56)％ ， 醋 酸 氯 己 定 (94.16? 2.69)％ ， 克 霉 唑 (96.83? 1.87)％ 。 结 论 ： 本 方 法 操 作 简 便 、 准 确 ， 适 用 于 制 剂 质 量 控 制 。 | ||
| 关 键 词 高 效 液 相 色 谱 法 替 硝 唑 醋 酸 氯 己 定 克 霉 唑 | ||
| 替 硝 唑 是 继 甲 硝 唑 后 的 新 型 硝 基 咪 唑 类 抗 厌 氧 菌 及 抗 原 虫 药 物 [1]， 我 们 将 其 与 克 霉 唑 、 醋 酸 氯 己 定 配 成 复 方 妇 科 栓 剂 用 于 多 种 阴 道 炎 的 治 疗 。 中 国 药 典 1995版 [2]中 类 似 制 剂 双 唑 泰 栓 (甲 硝 唑 、 克 霉 唑 和 醋 酸 氯 己 定 )的 含 量 测 定 采 用 多 次 提 取 分 离 后 ， 分 别 用 非 水 滴 定 法 和 分 光 光 度 法 测 定 各 组 分 含 量 ， 操 作 繁 琐 且 较 难 掌 握 。 迄 今 尚 未 见 有 同 时 测 定 复 方 替 硝 唑 栓 剂 中 替 硝 唑 、 克 霉 唑 和 醋 酸 氯 己 定 含 量 的 方 法 报 道 。 本 文 采 用 HPLC法 ， 仅 经 过 简 单 提 取 ， 即 可 同 时 分 析 复 方 替 硝 唑 栓 中 3组 分 的 含 量 ， 方 法 快 速 、 准 确 ， 适 用 于 制 剂 的 质 量 控 制 。 | ||
| 1 材 料 与 方 法 1.1 仪 器 与 色 谱 条 件 Waters 600E高 效 液 相 系 统 ， 包 括 600泵 ， 486可 调 紫 外 检 测 器 ， 600系 统 控 制 器 ， PC－ 800色 谱 工 作 站 。 Waters Symmetry C8柱 3.9? 150mm,5μ m;流 动 相 ： 甲 醇 ： 水 (45∶ 55， H3PO4调 pH=2.50)， 流 速 为 1ml/min， 检 测 波 长 为 260nm， 柱 温 25℃ ， 进 样 量 20μ l。 |
| 1.2 试 剂 和 药 品 替 硝 唑 (印 度 CHEMPHAR)； 克 霉 唑 、 醋 酸 氯 己 定 对 照 品 购 自 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所 ； 复 方 替 硝 唑 栓 (本 院 药 剂 科 自 制 )， 其 他 辅 料 均 符 合 药 用 规 定 ： 甲 醇 (色 谱 纯 ， 湖 南 化 工 研 究 院 精 化 所 )， 水 为 重 蒸 馏 水 ， 其 余 均 为 分 析 纯 。 |
| 1.3 储 备 液 精 密 称 取 替 硝 唑 106.60mg， 醋 酸 氯 己 定 10.38mg， 克 霉 唑 50.88mg， 分 别 加 甲 醇 溶 解 定 容 至 50ml， 4℃ 储 存 备 用 。 |
| 1.4 标 准 曲 线 的 制 备 分 别 精 密 量 取 上 述 储 备 液 适 量 混 匀 ， 用 流 动 相 配 制 成 含 替 硝 唑 33.31～ 266.50mg/ml,醋 酸 氯 己 定 1.30～ 10.38μ g/ml克 霉 唑 15.90～ 127.20μ g/ml， 系 列 浓 度 的 混 合 标 准 液 ， 进 样 分 析 ， 按 外 标 法 以 峰 面 积 (A)对 浓 度 (C)进 行 线 性 回 归 。 |
| 1.5 样 品 测 定 取 本 品 10粒 ， 精 密 称 定 ， 微 温 使 熔 化 ， 混 匀 ， 冷 却 后 精 密 称 取 适 量 (约 相 当 于 替 硝 唑 50mg)， 置 100ml量 瓶 中 ， 加 入 无 水 乙 醇 30ml,50℃ 水 浴 加 热 ， 充 分 振 摇 ， 冷 却 至 室 温 加 入 蒸 馏 水 定 容 ， 混 匀 ， 用 干 燥 滤 纸 滤 过 ， 弃 去 初 滤 液 ， 精 密 量 取 续 滤 液 5ml于 50ml量 瓶 中 ， 加 40％ 甲 醇 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 进 样 分 析 。 |
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2 结 果 |
| 2.1 色 谱 行 为 与 系 统 适 用 性 试 验 在 本 文 所 用 色 谱 条 件 下 ， 各 组 分 在 10分 钟 内 均 可 出 峰 ， 且 峰 形 尖 锐 对 称 ， 替 硝 唑 与 醋 酸 氯 己 定 分 离 度 为 4.27， 醋 酸 氯 己 定 与 克 霉 唑 分 离 度 为 5.66， 理 论 塔 板 数 以 醋 酸 氯 己 定 计 为 2600， 基 线 平 稳 干 净 ， 样 品 液 色 谱 图 见 图 1。 | ||||||||||||||||
| 2.2 线 性 关 系 三 组 分 标 准 曲 线 结 果 如 表 1所 示 ， 线 性 良 好 。 | ||||||||||||||||
| 取 同 批 号 的 样 品 5份 ， 依 上 法 测 定 ， 结 果 见 表 1。 表1 三种组分回归和线性范围(n=4) | ||||||||||||||||
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| 2.4 精 密 度 取 标 准 曲 线 项 下 同 一 标 准 对
照 液 重 复 进 样 5次 ， 测 定 峰 面 积 ， RSD分 别 为 替 硝 唑 0.29％ ， 醋 酸 氯 己 定 0.42％ ， 克 霉
唑 0.14％ 。 2.5 重 现 性 取 回 收 率 项 下 同 一 样 品 5份 ， 依 样 品 测 定 项 下 测 定 ， RSD分 别 为 替 硝 唑 0.38％ ， 醋 酸 氯 己 定 0.84％ ， 克 霉 唑 0.60％ 。 2.6 含 量 测 定 取 3批 号 的 样 品 ， 依 上 述 方 法 测 定 含 量 ， 结 果 见 表 2。 表２样品含量测定结果 | ||||||||||||||||
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3 讨 论 | ||||||||||||||||
| 3.3 在 一 般 的 C18键 合 相 上 ， 替 硝 唑 、 克 霉 唑 和 醋 酸 氯 己 定 的 色 谱 保 留 行 为 差 异 很 大 ， 尤 其 是 醋 酸 氯 己 定 ， 由 于 其 分 子 结 构 中 含 有 多 个 胍 基 ， 与 硅 胶 表 面 的 游 离 硅 醇 基 有 较 强 的 氢 键 作 用 和 亲 硅 醇 基 效 应 ， 使 其 色 谱 峰 形 展 宽 并 严 重 拖 尾 。 文 献 [3]采 用 由 甲 醇 ： 三 乙 胺 ： 辛 烷 磺 酸 钠 ： 磷 酸 盐 缓 冲 液 组 成 的 多 元 离 子 对 色 谱 体 系 以 改 善 醋 酸 氯 己 定 的 色 谱 行 为 ， 但 是 离 子 对 试 剂 、 三 乙 胺 和 磷 酸 盐 的 存 在 ， 会 使 色 谱 柱 冲 洗 再 生 较 麻 烦 ， 且 价 格 昂 贵 ， 对 柱 子 也 有 损 害 。 本 文 采 用 硅 醇 基 活 性 极 低 的 高 纯 度 硅 胶 Symmetry C8作 填 料 ， 同 时 考 虑 到 各 组 分 的 极 性 差 异 ， 选 择 甲 醇 ： 水 的 比 例 为 45∶ 55， 仅 通 过 pH值 来 改 变 醋 酸 氯 己 定 的 保 留 行 为 。 pH值 减 小 可 显 著 改 善 醋 酸 氯 己 定 的 峰 形 和 峰 位 ， 以 pH值 为 2.50时 较 好 。 由 于 对 称 性 填 料 的 应 用 ， 在 保 证 各 组 分 良 好 分 离 的 同 时 ， 大 大 简 化 了 流 动 相 组 成 ， 不 必 使 用 昂 贵 的 离 子 对 试 剂 ， 有 利 于 柱 再 生 和 保 养 ， 方 法 简 便 ， 快 速 ， 准 确 ， 适 用 于 该 制 剂 生 产 中 的 质 量 控 制 。 | ||||||||||||||||
| 参 考 文 献 | ||||||||||||||||
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1 乐 永 箕 ， 尹 玉 萍 .替 硝 唑 (Tinidazole)抗 厌 氧 菌 及
抗 原 虫 作 用 .中 国 医 院 药 学 杂 志 ， 1994； 14(2):92 |