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湖南医科大学附二院药剂科，长沙
410011
湖南医科大学药学系，长沙
410078
湖南中医学院药学分院
长沙 410007 |
[摘要] 目的：建立一种HPLC法测定虎梅冲剂中大黄素和大黄素甲醚的含量。方法：用氯仿提取；高效液色谱法用SupelcosilTMC8分析柱（150mm×4.6mm,5mm），流动相为甲醇-水（333：156），用磷酸调pH值至2.5，检测波长为254nm。结果：大黄素回归方程为Y=30518.0X+35607.0
r=0.9999 (n=6)，线性范围为28.7~129.0mg.ml-1，平均回收率为98.7%，RSD为2.5%，大黄素甲醚回归方程为Y=31550.0X-3063.1,
r=0.9998 (n=6)，线性范围为9.2~30.7mg.ml-1，平均回收率为98.6%，RSD为3.1%。结论：该法简便，准确，重现性好，可作为该制剂的质量控制方法。
[关键词] RP-HPLC；虎梅冲剂；大黄素；大黄素甲醚 虎梅冲剂是本院研制的一种复方中药制剂，由乌梅、虎杖等药材提取有效成分而制成，具有抗菌消炎、润肺止咳、清咽喉功效，主要用于急慢性咽喉炎的防治。君药虎杖中主要成分大黄素、大黄素甲醚能明显抑制金黄色葡萄球菌、肺炎球菌，是虎梅冲剂中主要有效成分，可作为质量控制的指标。至今，关于虎杖成份高效液相色谱法测定的报道极少，本文从提取条件、流动相组成等方面进行了较详细的考察，建立了HPLC法同时测定虎梅冲剂中大黄素、大黄素甲醚含量。
1． 仪器与试药 岛津LC-9A型高效液相色谱仪，浙江大学研制N2000色谱工站；SPD-6AV紫外可见检测器，KQ-600型超声波清洗器。
甲醇为光谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯；大黄素，大黄素甲醚购自中国药品生物制品检定所；乌梅、虎杖由本院中药房提供，虎梅冲剂为本院药剂科制备。
2． 色谱条件 SupelcosilTMC8分析柱（150mm×4.6mm,5mm），灵敏度为0.02AUFS，流动相为甲醇-水（333：156），用磷酸调pH至2.5；流速1.2ml.min-1，检测波长254nm；柱温：室温；进样量20mL；理论塔板数按大黄素峰计算为2880。 |
3． 试验方法
3． 1提取条件选择 精密称取样品适量，按文献[1，2，3，4]分别用1（水煎煮法）、2（甲醇超声法）、3（乙醇回流法）、4（氯仿回流法）四种方法提取，进样测定，以1g
虎梅冲剂所对应的大黄素、大黄素甲醚峰面积为纵坐标（Y轴），以不同提取方法为横坐标（X轴），得图1；图中结果表明，氯仿回流法最佳，故作为本文的提取方法。
图 1 A-大黄素，B-大黄素甲醚
3．2 对照品溶液制备 精密称取大黄素12.9 mg，大黄素甲醚3.2mg，用适量甲醇超声溶解，再用甲醇定容至100mL，制成贮备液。取大黄素、大黄素甲醚对照品溶液混匀后进样，得对照品色谱图，如图2。
3．3 样品溶液制备 取样品研成细粉，混匀，精密称量约1g，用氯仿 40mL，水浴回流1h，滤过，残渣再分别用氯仿
(40mL、40mL、30mL)回流30min，合并滤液，挥干氯仿，得残渣，用甲醇定容至25mL，摇匀，作为样品溶液，进样分析，其色谱图见图2。以外标法计算组份含量。
按处方量称取虎杖药材适量，照上法制备溶液，进样，得色谱图见图2。
3．4 阴性对照液制备 按处方量称取不含虎杖药材的阴性样品，然后按样品溶液制备方法制备溶液，进样，见色谱图2。对测定无干扰。
A B C D 图 2 A-阴性样品 B-混合对照品 C-虎杖药材 D-样品
3．5 线性范围考察 精密吸取大黄素对照品溶液适量，配成浓度分别为28.7、43.0、51.6、64.5、86.0、129.0mg.ml-1的溶液，进样测定，记录峰面积，以峰面积（Y）对浓度（X）进行回归，得大黄素的线性方程为Y
=30518.0 X +35607.0 ，r＝0.9999 （n = 6）；精密吸取大黄素甲醚对照品溶液适量，配成浓度分别为9.2、11.5、15.3、18.4、23.0、30.7mg.ml-1的溶液，进样测定，记录峰面积，以峰面积（Y）对浓度（X）进行回归，得大黄素甲醚的线性方程为Y
= 31550.0X - 3063.1 ，r＝0.9998 （n = 6）。
3．6 精密度试验 取大黄素，大黄素甲醚混合溶液，连续进样6次，得对照品峰面积，计算大黄素峰面积的RSD 为1.1%，大黄素甲醚峰面积的RSD为2.0%。
3． 7 稳定性试验 对批号为20000114样品溶液在0、0.5、1、2、3、5h分别进样，记录峰面积，结果6次进样，大黄素峰面积的RSD为1.6%，大黄素甲醚峰面积的RSD为2.0%，可见样品溶液较稳定。
3． 8 回收率测定 称取已知含量的同一批号样品5份，分别加入对照品贮备液适量，按样品制备方法制得溶液，进样，测得回收率，其结果见表1、2。
3． 9 样品测定 按上述方法，分别测定3批样品，结果见表3。 表1 大黄素回收率试验结果 |
| 称样量 /g |
相当大黄素量 /mg |
加入大黄素量 /mg |
测得量 /mg |
回收率 /% |
平均回收率/% |
RSD /% |
| 1.0167 |
1600.3 |
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2465.3 |
95.8 |
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| 1.0322 |
1624.7 |
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2519.0 |
99.0 |
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| 1.0201 |
1605.6 |
903.0 |
2514.4 |
100.6 |
98.7 |
2.5 |
| 1.0092 |
1588.5 |
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2503.9 |
101.4 |
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| 1.0062 |
1583.7 |
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2455.6 |
96.6 |
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表2 大黄素甲醚回收率试验结果
| 称样量 /g |
相当大黄素量 /mg |
加入大黄素量 /mg |
测得量 /mg |
回收率 /% |
平均回收率/% |
RSD /% |
| 1.0167 |
290.7 |
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574.0 |
98.4 |
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| 1.0322 |
295.1 |
|
577.1 |
97.9 |
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| 1.0201 |
291.6 |
288.0 |
589.3 |
103.4 |
98.6 |
3.1 |
| 1.0092 |
288.5 |
|
572.6 |
98.6 |
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| 1.0062 |
287.7 |
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561.1 |
94.9 |
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表3 三批样品中大黄素、大黄素甲醚含量测定结果
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批号
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大黄素 /mg.g-1
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大黄素甲醚 /mg.g-1
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20000217
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1740.2
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300.0
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20000331
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1690.0
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304.1
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20000421
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1788.8
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321.2
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4． 讨论
4．1 从图1可知，乙醇回流法与氯仿回流法所得的峰面积较接近，但用乙醇提取所得样品杂质较多，影响测定，而且前者提取过程较繁锁，故选氯仿回流作为文中的提取方法。
4．2 按文献[5，6，7]比较了不同组成的流动相即不同配比的甲醇-水-高氯酸、甲醇-水-冰醋酸、甲醇-水-磷酸；结果表明以甲醇-水（333：156），用磷酸调pH至2.5的流动相所得的峰达到基线分离，且峰形很好，在13min内出完所有的峰；流动相pH控制尤为重要，若pH高于4，峰出现拖尾现象。经预试发现，若采用C18柱，大黄素与大黄素甲醚不能分离，且与杂质也分离不好，而采用C8柱，不但分离完全，峰也较尖锐。
参考文献 1． 苏子仁，曾惠芳，史俏蓉. 虎杖提取工艺初探. 中国实验剂学杂志，1998，4（1）：9
2． 卫生部药典委员会编. 中国药典（一部）. 广东化工出版社出版，1995：179
3． 朱莲华，王智华. 不同产地何首乌的质量分析. 中成药，1999,21(1)：36.
4． 唐刚，王义明，王如骥等. 高效液相色谱法测定洁脉冲剂中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量. 药物分析杂志，1999,19(5)：340.
5． 王兰霞，赵菊霞，冯详瑞等. 应用HPLC法同时测定山大黄消炎止血胶囊中大黄素、大黄酚、芦荟大黄素的含量. 中成药，1996.18(11)：11.
6． 闵小平，丁会，王曼玲等. 宽胸解毒颗粒质量标准的研究. 中国实验方剂学杂志，1998,4(1)：7
7． 大岛俊幸，平山总良，王珂等，高效液相色谱法测定何首乌和夜交藤蒽醌成分的含量. 药物分析杂志，1996,16(4)：219.
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