真心平胶囊由延胡索、丹参、栝楼等中药组成。延胡索为主药,其主要成分为延胡索乙素,该制剂质量标准研究中选择了延胡索乙素为含量测定成分。本方法采用氨水碱化后直接乙醚提取,利用硅胶G薄层层析对样品进行分离分析,建立了真心平胶囊中延胡索乙素含量测定方法
1 实验部分
1.1 仪器与试剂:岛津CS-9000
型薄层扫描仪,定量毛细管(CAMAG公司);延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所);真心平胶囊由天津万通药业有限公司提供;试剂均为分析纯。
1.2 供试液的制备:取真心平胶囊内容物10 g精密称定,置250 mL棕色锥形瓶中,加入浓氨水40
mL,摇匀,超声提取20 min,精密加入乙醚100 mL,精密称定重量,超声提取2
h,放至室温,精密称定重量,用乙醚补足重量。摇匀,倾出上清液,精密吸取50
mL,减压浓缩至干。用氯仿转入5 mL容量瓶中,加氯仿至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
1.3 对照品溶液的制备:精密称取延胡索乙素对照品,用氯仿溶液使成1
mg/mL溶液,作为对照品溶液。
1.4 薄层层析及扫描:分别定量吸取供试品溶液10 μL,对照品溶液2、4
μL,分别点于同一含羧甲基纤维素钠的硅胶G薄层板上,以苯-丙酮(8∶2)为展开剂上行展开,展距10
cm,取出,晾干,喷以改良碘化铋钾试液,用冷风吹干,双波长锯齿扫描,测定波长500
nm,参比波长 570 nm,狭缝1.0 mm×1.0 mm, Sx=3,灵敏度×1,按外标两点法计算得供试品液中延胡索乙素含量。
2 结果
2.1 提取方法的选择:据文献报道延胡索乙素溶于乙醚和氯仿,提取前先用浓氨水进行碱化,使延胡索乙素游离,然后用乙醚提取。
2.2 提取时间的考察:选用同一批号样品,分别进行1.5、2、2.5、3 h超声处理,点在同一板上,测定延胡索乙素的含量,结果见表1。
表1 提取时间的考察
时间(h) |
1.5 |
2 |
2.5 |
3 |
含量(mg/g) |
0.17 |
0.22 |
0.22 |
0.18 |
测定数据表明,选定提取时间为2h。
2.3 碱化方法的选择:开始选用浓氨水20 mL碱化,但在实验中发现,加浓氨水后样品很快成膏状,加入乙醚提取时,膏体不能充分分散,膏体内的成分不能提取完全,而加入40
mL浓氨水后,样品成流体,经充分振摇后能充分将样品分散,乙醚能充分提取。因此选定加浓氨水40
mL。
2.4 扫描波长:经过对延胡索乙素进行全波长扫描,在500 nm处有最大吸收,参比波长选在570
nm最为合适。
2.5 标准曲线的绘制:本品1 mg/mL的延胡索乙素氯仿液作为对照品溶液,定量吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0
μL分别点于同一硅胶G薄层板上,展开,取出,晾干,喷以改良碘化铋钾试液,扫描测定,以浓度为横坐标,斑点面积积分值为纵坐标绘制曲线。延胡索乙素在1.0~5.0
μg之间呈良好线性关系,回归方程为:Y=84 566.46X+72 613.11,r=0.9975。
2.6 空白实验:取延胡索阴性样品,提取方法同供试品溶液处理、提取、扫描,空白样品在与对照品Rf值相应位置上没有斑点,不影响含量测定,所以此方法对延胡索乙素专属性强。
2.7 稳定性实验:将显色后的薄层板进行扫描,然后在1、2 h后进行测定,结果积分面积值在2
h内基本稳定。扫描时间可在2 h内进行。
2.8 精密度实验
2.8.1 仪器精密度:对同一斑点连续测定5次,RSD=1.3%,表明仪器精密度较高。
2.8.2 同板精密度:将样品分别点于同一薄层板上进行扫描测定,RSD=2.2%,表明同板精密度符合规定。
2.8.3 异板精密度实验:对同一样品用不同的板进行测定,计算含量,结果RSD=4.5%。表明异板精密度结果符合规定。
2.9 重现性实验:对同一批号样品分别测定5次,结果RSD=3.9%。表明该方法重现性较好。
2.10 回收率实验:取样品10 g,精密称定,精密加入2 mL对照品溶液(1.05
mg/mL),按供试品溶液的制备方法操作,制成供试品溶液,进行测定。同时对样品进行含量测定,计算回收率,平均为100.6%,RSD=2.3%(n=5)。
2.11 样品分析:按照制定的方法对10批样品进行测定,结果见表2。 表2 样品测定结果 |
批号 |
9509004 |
9507004 |
9507003 |
9507002 |
9507001 |
9505001 |
9503001 |
9509001 |
9509002 |
9509003 |
含量(mg/g) |
0.223 |
0.072 |
0.045 |
0.148 |
0.133 |
0.117 |
0.166 |
0.333 |
0.365 |
0.376 |
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