测定氯地霜中氯霉素和醋酸地塞米松的含量

           氯地霜是以氯霉素和醋酸地塞米松为主药，以硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、硬石蜡、凡士林、液体石蜡、甘油、三乙醇胺、尼泊金乙酯等为基质的乳剂型基质乳膏，临床上主要用于皮炎、湿疹、脂溢性皮炎、痤疮等症，效果良好。由于组分含量差别悬殊，基质成分干扰严重，紫外分光光度法［1］很难进行分离和测定，双波长等［2～4］计算分光光度法测定又存在霜剂基质成分复杂，组分质量时有差异，测定结果误差较大的问题。本文经过实验研究，选用了专属性较强的HPLC方法测定乳剂中氯霉素和醋酸地塞米松的含量，获得了比较理想的结果。
            1　仪器与试药
            P230型液相色谱泵、UV230型UV检测器。氯霉素、醋酸地塞米松对照品均购自中国药品生物制品检定所；氯地霜样品及空白基质由柳州市皮防站提供；甲醇为AR级。

            2　色谱条件
           色谱柱：PE-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(70∶30)，流速：0.5 mL.min-1；检测波长：240 nm；灵敏度：0.05AUFS；纸速：8 mm.min-1。

            3　对照品贮备溶液的制备
            精密称取氯霉素和醋酸地塞米松对照品适量，用甲醇溶解并稀释成含量分别为20 mg.mL-1和0.25 mg.mL-1的混合溶液，摇匀。

            4　系统适用性试验
            精密量取对照品贮备液2.5 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，在选定的色谱条件下，精密量取对照品溶液5 μL进样，色谱图见图1-A，氯霉素和醋酸地塞米松的保留时间分别为3.90、10.68  min；理论板数分别为2455、3950；二者的分离度为13.6。

            氯地霜样品预实验发现：在氯霉素和醋酸地塞米松色谱峰之间，比对照品色谱图多1个色谱峰，为基质中易溶于醇的尼泊金乙酯峰［5］，保留时间为5.53  min，见图1-B。该尼泊金乙酯峰与氯霉素的分离度为5.1，与醋酸地塞米松的分离度为10.3。此结果表明：在本文选定的色谱条件下，柱效和各峰之间的分离度均达到了实验要求。
            图1　氯霉素和醋酸地塞米松(A)及其乳膏(B)、基质(C)的色谱图
            1.氯霉素　2.醋酸地塞米松　3.尼泊金乙酯

            5　线性试验
            精密量取对照品贮备溶液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，分别置于50 mL量瓶中，用甲醇稀释定容，在上述色谱条件下，分别进样5 μL，记录峰面积。以组分峰面积X对浓度Y回归，得氯霉素及醋酸地塞米松的线性回归方程分别为：
            Y=5.1657+1.6568×10-4X　r=0.9997
            Y=1.1605×10-1+4.7525×10-5X　r=0.9998
            线性范围分别为600.0～1400.0、7.5～17.5 μg.mL-1。

            6　样品测定
            取本品适量(约相当于氯霉素50 mg，醋酸地塞米松0.625 mg)，精密称定，置小烧杯中，加甲醇适量，置80 ℃水浴中加热2   min，如此反复提取3次，放冷，过滤至50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，置水浴中冷却2 h以上，取出后迅速滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。取含氯霉素1 mg.mL-1、醋酸地塞米松12.5  μg.mL-1的对照品溶液和样品溶液各5 μL，分别注入液相色谱仪，记录峰面积，外标法计算2种成分在乳膏中的含量。

            7　加样回收试验
            精密称取已知含量的乳膏样品适量(约相当于氯霉素50 mg、醋酸地塞米松0.625 mg)，分别精密加氯霉素对照品40、50、60 mg；醋酸地塞米松对照液(0.25 mg.mL-1)2.0、2.5、3.0 mL，按样品含量测定项下方法提取，置100 mL量瓶中，并依法进行色谱测定，计算回收率，结果见表2
            表2　回收率测定结果(n=5)
            
                  成分加入量/mg平均回收率/%RSD/%
                  氯霉素38.5～41.599.20.9
                  48.5～51.599.61.2
                  58.5～61.599.81.2
                  醋酸地塞米松0.51100.21.2
                  0.6499.51.3
                  0.77100.71.2

            8　讨论
            8.1　检测波长的选择　本品中氯霉素和醋酸地塞米松的含量相差悬殊(98.8∶1.2)，为了提高醋酸地塞米松的检测灵敏度，实验选择醋酸地塞米松的最大吸收波长240 nm为测定波长。

            8.2　外标法的确定　由于色谱图(图1)中已经有了2个主成分峰及溶剂峰、基质(尼泊金乙酯)峰和醋酸地塞米松分解物峰(图2)，故很难找到合适的内标物质，使其既不影响样品的检测，同时又在该色谱条件下有合适的峰形，因此，选用外标法作为含量测定的方法。
            图2　醋酸地塞米松分解物的干扰实验
            1.氯霉素　2.尼泊金乙酯　3.地塞米松　4.醋酸地塞米松

            8.3　分解物的干扰实验　实验发现：本品中醋酸地塞米松的回收实验较理想，但送检样品中醋酸地塞米松的含量多偏低，贮存期样品尤甚。经分析是制剂中醋酸地塞米松已部分分解成地塞米松［6］的缘故(分解原因、速率及制剂稳定性、疗效待研究)。对本文建立的含量测定方法进行分解物的干扰试验，结果该分解物(地塞米松)的tR为7.2 min，不干扰氯霉素(tR=3.90 min)和醋酸地塞米松(tR=10.68 min)的测定，与基质中尼泊金乙酯(tR=5.53 min)也有较好的分离度，见图2。故本文建立的HPLC同时测定氯地霜中氯霉素和醋酸地塞米松两组分含量的方法是专属性较强、准确可靠的方法。用此法研究本制剂中醋酸地塞米松的分解速率也是很有效的。