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五味子为木兰科植物，是应用最广泛的滋补中药之一，具有益气、滋肾、敛肺、安神等功效，主治肺虚咳喘、盗汗、痢疾、遗精、神经衰弱、心悸、慢性肝火等症。湖北兴山五味子(Schisandra incarnata)分布于湖北西部，在当地俗称“北五味子”，但与中国药典2000版收载的“北五味子”不同。五味子甲素(1)是五味子的主要活性成分之一，有明显的促进肝糖元生成、降低转氨酶、保护肝细胞等作用。因此，本文对兴山五味子中的1进行了提取分离， 以求扩大五味子药材来源。
五味子中1的提取方法主要有3种。(1)回流提取法，如醇提、水提等，操作简单，成本低，易扩大生产；(2)超临界CO2萃取法，设备要求高；(3)法多索溶剂(phytosol solvent)法，操作复杂，设备容量仅100g，不易扩大生产。本文参照文献的回流提取法，并建立了RP-HPLC法对提取物进行分析。
1 仪器和试药
Waters高效液相色谱仪，包括2690型高压泵、996型二极管阵列检测器。兴山五味子(湖北宜昌中药材公司， 由湖北宜昌药品检验所鉴定)： 1对照品(中国药品生物制品检定所，含量大于98％)。
2 方法与结果
2．1 分离提取
取兴山五味子20g，磨碎，用水浸泡24h后烘干，加甲醇回流提取。由于甲醇浓度(A)、提取时间(B)、提取次数(C)和甲醇一样品的比例(D)等因素对提取率均有影响，采用正交试验(因素水平见表)进行工艺优化。结果表明，A、B、D3因素对五味子的分离提取影响较大。最佳条件为A2B1C2D3(正交结果存编辑部备索)。
取按优化工艺制得的提取液，蒸干后以少量氯仿溶解，上氧化铝柱，依次用石油醚(30～60℃)和氯仿洗脱，收集氯仿洗脱液，蒸干后加甲醇溶解并定容至10ml，摇匀，作为供试品溶液。
2．2 色谱条件优化
流动相：曾采用不同配比的甲醇-水(85：15、70：30、60：40)为流动相进行分离测定。结果表明，随着甲醇比例的减小，1的保留时间延长，但其它杂质峰明显较多。采用甲醇-水(85：15)作流动相，线性关系和重现性均较好，且流速控制在1ml／min时分离效果最好。
柱温：柱温对1的色谱行为有较大影响。柱温过高或过低都会导致1及五味子乙素与其它杂质的分离度减小，甚至达不到基线分离。本试验采用柱温30℃ ，分离效果较好。
检测波长：于190～400nm波长范围内进行紫外扫描，1在220nm处有最大吸收，且响应最强，故选择220nm为检测波长。
优化所得色谱条件为： 色谱柱Nova—Pak C18(3.9mm×150mm，4μm)；流动相甲醇-水(85：15)；流速1ml／min：柱温30℃：检测波长220nm。在本色谱条件下，1保留时间约为3min。
2．3 线性试验
精密称取减压干燥至恒重的1对照品3mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀。分别精密量取3、5、7、9、11和15μ1，进样测定。以峰面积(A)为纵坐标，1进样量Q(μg)为横坐标，绘制标准曲线。得1回归方程A=3.81×1000000一4.43×10000(r=0.9999)。
2．4 精密度试验
精密量取0.3mg／ml的1对照品溶液10μl，于1d内连续测定6次，得RSD为0.25%。
2．5 兴山五味子中1的测定
精密量取“2．1”项下供试品溶液进样测定。代入标准曲线计算得兴山五味子中1的平均含量为0.22％(n=5)。
来源：东方医药网