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克心疼缓释片是山东中医药大学研制的中药复方缓释制剂，能有效地防治冠心病、心绞痛。方中主要包含麝香、延胡索、川芎等中药，其中延胡索的主要有效成分为延胡索乙素，其测定方法有紫外二阶导数光谱法、流动注射分析法、HPLC法和薄层色谱法等。紫外二阶导数光谱法抗干扰能力较差；流动注射法灵敏度较低，且工作曲线分段绘制，线性范围较窄，给测定带来不便；HPLC法分离迅速，但峰展宽效应明显；薄层色谱法操作比较繁琐，且操作时间较长。毛细管电泳分离测定延胡索乙素未见报道。本实验首次采用毛细管区带电泳模式，建立了分离测定克心疼缓释片中延胡索乙素的新方法。本方法实验操作简便迅速，进样量极少，分离完全，峰形正常，线性范围较宽，重现性好，特别适合复杂样品的分离测定，在样品谱图中出现多个峰，分离良好，为多组分同时测定奠定了基础。
1 仪器与试药
HPCE毛细管电泳仪，二极管阵列检测器。延胡索乙素对照品由中国药品生物制品检定所提供；克心疼缓释片(每片0.5g)样品由山东中医药大学提供；磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、甲醇、氯仿均为分析纯；水为二次蒸馏水。缓冲液和样品溶液均用0.45μm滤膜过滤处理。
2 电泳条件
毛细管柱：75μm×8.5cm(有效长度72.5cm，未涂层)；运行缓冲液：0.05mol/L磷酸盐(pH 6.0)一30％甲醇；操作温度：30℃；运行电压：30kV；检测波长：200nm，对峰面积进行时间校正；正极进样1 kPa×5 s。每次进样前依次用0.1mol/L氢氧化钠溶液冲洗柱1min，二次蒸馏水冲洗1min，缓冲液冲洗2min。
3 线性关系的考察
准确称取延胡索乙素l0mg，甲醇溶解，定容至l0mL，摇匀，得浓度为1.0mg/mL 的对照品贮备液。精密量取贮备液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4mL置5mL容量瓶中，用甲醇分别定容至刻度。依次进样，按上述电泳条件测定。以浓度(mg/mL)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。延胡索乙素的浓度在0.04～0.28mg/mL范围内与峰面积呈线性关系。回归方程为：Y=0.35+273.5lX r=0.9993。
4 回收率试验
取已测知含量的克心疼缓释片样品5份(各约0.5g)，精密称定，各加入0.20mg/mL对照品溶液2.0 mL，按“6”项下方法操作，测定回收率。结果平均回收率为98.07％，RSD为0.76％(n=5)。
5 精密度试验
取0.20mg/mL 对照品溶液，重复进样5次，延胡索乙素峰面积的RSD为1.4％。
6 含量测定
精密称取克心疼缓释片约0.5 g，用pH3的盐酸50mL浸泡30血后，回流提取2次，每次20min，合并提取液，调pH为8～9，用氯仿(50，30，20mL)萃取3次，合并萃取液，水浴挥干氯仿，残留物用甲醇转移至5mL容量瓶中并定容至刻度，进样测定，按标准曲线法定量。共测定了3批样品，含量分别为0.072％，0.070％，0.070％(n=3)。
7 讨论
7．1 缓冲液pH的确定
延胡索乙素的荷电性随pH的不同而异，pH>7时，延胡索乙素以中性分子形式存在。在毛细管区带电泳模式下，中性组分之间难以分离，当缓冲液pH>7时，延胡索乙素会与样品中的其它中性组分同时出峰，使定量困难。而当pH<7时，延胡索乙素以阳离子形式存在，在中性组分之前出峰，易于定量。缓冲液pH对延胡索乙素与中性组分分离的影响可见，缓冲液pH越高，延胡索乙素出峰越快；中性组分随电渗出峰，而电渗也随pH的上升而增大，使延胡索乙素与中性组分峰随pH的升高而逐渐靠近，当pH为6.5时，已非常接近。为使延胡索乙素既能迅速出峰，又便于识别，本实验选择缓冲液pH6.0。
7．2 甲醇用量的确定
缓冲液中甲醇含量的多少直接影响克心疼缓释片样品中延胡索乙素与其它杂质峰的分离。本文对缓冲液中甲醇体积百分数(％)为0，10，20，30，柏时分离情况进行了考察，结果表明，若缓冲液中不加甲醇，则延胡索乙素与前后两邻峰不能分离，加入甲醇则可明显改善分离，甲醇超过20％时，延胡索乙素已可与邻峰基线分离。由于甲醇的加入同时会降低电渗，使延胡索乙素出峰时间随甲醇用量的增加而延长，为既保证分离，又能缩短出峰时间，本实验选择甲醇体积分数为30％。
7．3 同存成分的干扰
实验中样品处理采用酸水提取，碱化后氯仿萃取的方法，目的在于提取总生物碱，而其它成分则被排除，所以方中麝香和川芎对延胡索己素的测定无影响。延胡索总碱的种类很多，据文献报道，可达十几种乃至几十种，且性质相近，分离困难。本实验采用毛细管电泳法，样品谱图中出现多个峰，且基线分离，峰形正常，从而保证了延胡索乙素测定结果的准确性。图中所出各峰，可能都属于延胡索碱类，但因缺乏对照品，故未作实验验证。
参考文献
1刘布鸣，雷萍，周桂芬等(紫外二阶导数光谱法测定血浆中延胡索乙素的方法研究)．(药物分析杂志)．1988．8(5)：299
来源：东方医药网