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摘要：目的利用非水毛细管电泳(NACE)法对麻黄中各生物碱类有效成分进行含量测定，并比较不同提取方法中各组份含量差异。方法采用50mmol／L醋酸铵的甲醇溶液，未加入任何其他添加剂，检测波长为210nm。结果：各组份在8min内达基线分离。伪麻黄碱在9.8～147.0μg／mL，去甲基麻黄碱在6.8～102.0μg／mL，麻黄碱在9.4～141.0μg／mL，去甲基伪麻黄碱在4.8～72.0μg／mL，甲基麻黄碱在6.8～102.0μg／mL分别有良好的线性关系。各麻黄碱类回收率在95.0～100.4%。结论为麻黄中各生物碱类有效成分的含量测定提供了一种快速、准确和灵敏的测定方法。
关键词：麻黄；麻黄碱类生物碱；非水毛细管电泳；含量测定
麻黄为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinica Stapf的干燥草质茎，始载于《神农本草经》。具有发汗散寒、宣肺平喘、利水消肿的功能。为临床上治疗上呼吸道疾患的重要中药材之一。麻黄主要含生物碱，总生物碱含量约为1.3%，主要有麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱、甲基伪麻黄碱、去甲基麻黄碱、去甲基伪麻黄碱。《中华人民共和国药典》中含量测定方法规定总生物碱不得少于0.80％。各麻黄生物碱结构相近，两两之间为差向异构体，但药理作用有所差异，有必要建立快速、准确的分离分析方法对各种麻黄碱类生物碱分别进行测定。
自1990年Kenndler等将毛细管电泳(CE)技术首次用于熊果中的熊果苷等的化学成分分离与测定以来，CE法在天然产物分离分析中的应用得到了迅速发展，分离成分主要包括生物碱、黄酮、苷类、有机酸、香豆素、木脂素、醌类等，国内已有该方面的综述报道。本实验首次利用非水介质毛细管电泳(NACE)方法对麻黄中5种生物碱进行定量分析，并对不同的提取方法进行对比研究，为分析麻黄中各生物碱含量及优化麻黄提取工艺提供快速、有效的方法。
1 仪器与试剂
P／ACE 5500毛细管电泳仪(美国BECKMAN公司)，带有二极管阵列检测器(DAD)，system Gold工作站。实验所用药材经本校中药学院余伯阳教授鉴定为草麻黄E．sinica Stapf的干燥草质茎。麻黄碱类生物碱标准品均由江苏省药物研究所提供，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 电泳条件：检测波长210nm，毛细管总长57cm，有效长度50cm，内径50μm，未涂渍；运行电压30kV，压力进样，时间5s。缓冲液为50mmol／L醋酸铵的甲醇溶液。各类型非水溶液在使用之前均用0.45μm微孔滤膜滤过。
2．2 供试品溶液的制备：称取0.5g麻黄药材粉末，分别用50mL1％盐酸溶液和水作为提取溶液，用索氏提取法，加热回流2h。将提取液滤过后，旋转蒸发至干，再用甲醇稀释至10mL作为供试品液A和B。再取同法得到的酸提取液移人分液漏斗，加人NaCI约1g，依次加入乙醚20，10，10mL萃取，合并醚层，用15mL水洗涤后弃去，洗涤液并入水层，加入浓氨水5mL，再依次加入氯仿20，10，10mL萃取，合并氯仿层后，旋转蒸发至干，用甲醇定容至1OmL。得供试品溶液C。
2．3 对照品溶液的制备：分别称取麻黄碱(E)11.75mg，伪麻黄碱(PE)12.25mg，甲基麻黄碱(ME)9.25mg，去甲基麻黄碱(NE)8.50mg，去甲基伪麻黄碱(NPE)6.00mg，置于25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品储备液。
2．4 方法学考察
2．4．1 线性范围：精密称取12.51 mg萘羟心安，置于25 mL量瓶中用甲醇稀释至刻度，作为内标储备液；分别吸取各对照品储备液0.2，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，内标储备液1.0mL，置于10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，按前述条件分别进行CE测定，以各对照品峰与内标峰面积比(A／Ai)为纵坐标，浓度C(μg／mL)为横坐标，得到标准曲线及线性范围。
2．4．2 最低检出浓度：按信噪比( S/N)为3计算，得各组份的最低检出浓度。
2．4．3 精密度试验：取中间浓度的各对照品溶液，重复进样5次，测得的峰面积比RSD平均为1.26％。
2．4．4 取样品溶液A 分别于制备后0，2，4，6，8h进行测定，峰面积比RSD为1.96％ 。
2．4．5 回收率的测定：称取0.5g麻黄粉，加入5mL标准储备液及内标储备液，按前述酸提法提取、定容，溶液用0.45μm 滤膜滤过后，进行CE分析，(由于对照品量有限，只进行了主成分PE的高、中、低回收率测定)。
2．4．6 供试品溶液中各生物碱的含量测定：分别精密吸取供试溶液A，B，C各4mL及内标储备液1mL置于3只1OmL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，溶液均用0.45μm滤膜滤过，进行CE分析，平行测定5份，方法重现性及含量测定。
3 讨论
3．1 文献报道的各种方法多为测定麻黄碱和伪麻黄碱中一种或两种生物碱含量，而同时分离分析多种麻黄碱类生物碱的方法主要是HPLC法和CE法，但前者分离效率低且分析时间较长，前处理步骤繁琐；CE法均采用水溶液系统，需加人多种添加剂，有些添加剂昂贵且不易得，而且添加剂的加入使分离体系复杂，可能会影响样品检测和分离重现性。本文所采用的NACE法体系简单，分离效率高，适用于药材中麻黄碱类生物碱的含量测定。
3．2 测定条件的选择：通过对有机溶剂的种类和比例，醋酸铵溶液的浓度等条件的摸索，确定了最佳分离条件。
3．3 提取条件的选择：总生物碱的溶剂提取方法中可用的溶剂有水-有机溶剂、酸水-有机溶剂、醇-有机溶剂、碱-有机溶剂等，根据麻黄碱自身特点，现多采用前两种溶剂，即先用水或酸水提取后，再经过乙醚及氯仿的萃取才能得到。实验结果表明，以主成分伪麻黄碱的提取率为标准，以1% HCl溶液为溶剂，中药麻黄的浸提效果最好，本实验中比较了未萃取液(A)和萃取液(C)的各组份含量情况，两者差异没有显著性。由于毛细管电泳自身的优势，如分析高效、快速、简便，柱不易受污染等，中药提取液不经萃取去除杂质即可直接进行CE分析，简化操作步骤，使测定回收率提高。
References：
[1] Wen Z M ，Zhang J L。Xu L M．Application of HPCE to the analysis of traditional herbal drugs [J]．Chin Tradit Herb Drugs(中草药)，2000，31(2)：141—144．
来源：东方医药网