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目前，测定绿原酸含量的方法很多，常采用毛细管电泳法、HPLC法、可见分光光度法和纸层析-紫外可见分光光度法等。但样品处理均采用索氏回流提取，后经层析分离洗脱等步骤。时间长、效率低。本文采用紫外可见分光光度法测定绿原酸含量，只需超声波提取一小时。不经分离纯化而直接测定，具有快速准确、稳定性好等特点，适合大批量样品分析测试。
1 材料与方法
紫外可见分光光度计：UV-160A(日本岛津)；超声波洗涤器：MS-5000(日本Yamato)；甲醇(AR)(湖南师大试剂厂)；绿原酸标样(上海进口分装)。供试材料杜仲叶于1997年5月采于江垭林场。
2 研究方法
2．1波长的选择
根据绿原酸可溶于水、甲醇的性质．精密称取绿原酸标样10.1mg，用50％甲醇溶液溶解定容至10ml稀释10倍后予800～200nm范围内扫描，以50％甲醇溶液作参比，在325nm处有最大吸收蜂。另将绿原酸标准液点条样于层析纸上，用水作展开剂展开后，于紫外灯下去掉荧光部分(即绿原酸部分)，其余部分用50％甲醇溶液超声提取l5分钟，以50％甲醇作参比，在800—200nm范围内扫描，在345nm处有最大吸收峰，故选定345nm、325nm，为测定波长，其绿原酸吸光值为(△A=A325一A345)。
2．2标准曲线的制备
精密称取绿原酸标样适量，用50％的甲醇溶液稀释成每毫升含绿原酸5.05、10.1、15.15、20. 2、30.3、40.4μg的标准溶液，以50％甲醇溶液作参比．在345nm 325nm处测定A345、A325值，求得A(△A=A325—A345)，以样品的浓度C(μg／ml)为横坐标，吸光度△A为纵坐标，绘制A—C标准曲线，求得回归方程为：C=K△A+B，其中K=66.247，B=一0.5808。
2．3样品的测定
精密称取杜仲叶粉0.5000g于6Oml试管中，加入40ml 50％甲醇溶液，放人超声波洗涤器中超声提取15min后过滤。滤渣再加入40ml 50％ 甲醇溶液，超声提取15min，共重复上述操作四次(三个平行)，合并滤液定容至250ml。在紫处可见分光光度计上以50％甲醇为参比，测定A325、A345值，求得绿原酸含量。
3 结果与分析
3.1 测定结果
3．2 稳定性实验
将测定的样品在室温下放置24小时后再测定其吸光值A变化不大，说明在5O％甲醇溶液中稳定。
3．3 回收率实验
将标样配成一定浓度加人已溯样品中．测定其含量，计算回收率。
4 结论
(1)绿原酸在5.05～40.4μg/ml之间，其吸光度△A=A325一A345与浓度呈良好线性关系。
(2)采用紫外可见分光光度法测定杜仲叶中绿原酸含量，其稳定性好、重复性好，回收率为104.2％。此方法简便、快速、准确、稳定，可用于杜仲叶片绿原酸含量的测定。
参考文献
1 孟芹等，纸层析-分光光度法测定杜仲中绿原酚的含量．云南中医学院学报，1994，17(4)：21—22
2 张风云等，杜仲叶中绿原酸的测定方法比较，西北林学院学报，1996，11(2)：54—57
来源：东方医药网