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摘要 目的：建立测定小野芝麻中毛蕊花糖苷含量的毛细管电泳方法。方法：采用胶束毛细管电泳法(MECC)，未涂层弹性石英毛细管(75μm×56cm，有效长度50cm)；压力进样，压力：138kPa，进样时间：10s；电压：15kV；柱温：25℃；检测波长：350nm；运行缓冲液：50 mmol/L硼酸溶液-50mmol/L磷酸二氢钠溶液-20mmol/L脱氧胆酸钠溶液(1mol/L 氢氧化钠溶液调pH=8.5)；运行时间：35min。结果：测得平均回收率为96.8％，RSD为1.1％。结论：方法准确可靠，适合于小野芝麻中毛蕊花糖苷的含量测定。
关键词：小野芝麻；毛蕊花糖苷；胶柬毛细管电泳
MECC Determination of Vlerbascoside in Galeobdolon chinense(Benth．)C．Y．Wu
Abstract Objective：To establish an HPCE method for the determination of verbascoside in Galeobdolon
chinense．Methods：The separation was performed on a fused and uncoated silic capillary of 75μm×56cm (50cm of effective length)．50 mmol/L boric acid-50 mmol/L sodium dihydrogen phosphate-20 mmol/L sodium deoxycholic acid(adjusted pH to 8.5 with l mol/L sodium hydroxide)was used as running buffer．Sam—pie were injected hydrodynamically(15s，138kPa)into the capilary．The applied voltage was 15kV and the detection was set at 350nm．The running time was 35min．Result：The average recovery was 96.8％(RSD=1.1％)．Conclusion：The method is reliable，and suitable for the determ ination of verbascoside in Galeobdolon chinense．
Key words：Galeobdolon chinense；verbascoside；MECC
小野芝麻为唇形科植物小野芝麻Galeobdolonchinense(Benth．)C．Y．Wu的干燥全草。性寒味苦，归肝、脾、肺经。具清热解毒，凉血止血，止咳之功效。在民间，用于治疗急性扁桃体炎、气管炎、肺结核、上呼吸道出血及肺部出血等症，疗效显著。经查有关文献资料，国内外尚未有对小野芝麻化学成分、药理作用进行研究的报道。我们对小野芝麻的化学成分进行了研究，从小野芝麻药材醋酸乙酯提取物中分离得到了毛蕊花糖苷、金丝桃苷等成分。文献报道的毛蕊花糖苷的分析方法有HPLC法，未见有关毛细管电泳的应用，本文利用胶束毛细管电泳(MECC)，对小野芝麻药材中毛蕊花糖苷的含量进行测定，为控制药材的内在质量提供一种新的分析方法。
1 仪器与试药
美国Beckman P／ACE 5500型毛细管电泳仪，DAD检测器，弹性石英毛细管(75μm×56cm，有效长度50cm，河北永年光导纤维厂)。毛蕊花糖苷对照品、槲皮素对照品(内标物)及金丝桃苷对照品均由中国药品生物制品检定所提供。
胆酸钠及十二烷基磺酸钠(SDS)为Sigma公司产品，脱氧胆酸钠为北京怀柔生物研究开发所产品。硼酸、磷酸二氢钠均为分析纯，实验中配制缓冲液和样品液所用的水均为高纯水(Mili-Q)。
小野芝麻采集于浙江、福建、江西等地，由中国药品生物制品检定所标本馆张继副主任药师鉴定。
2 分离条件
进样方式，压力进样，压力138kPa，进样10s；分离电压为15kV(恒压分析)；柱温25℃；检测波长350nm；以50 mmol/L。。硼酸溶液一50 mmol/L磷酸二氢钠溶液一20mmol/L脱氧胆酸钠溶液(1mol/L 氢氧化钠溶液调pH至8.5)为运行缓冲液，每次运行前毛细管用0.1mol/L 氢氧化钠溶液冲洗3min，去离子水冲洗2min，运行缓冲液冲洗3 min。
3 溶液制备
3．1 内标溶液
取50℃真空干燥至恒重的槲皮素对照品24.O0mg，加50％的甲醇制成每1mL含0.12mg的溶液，即得。
3．2 对照品储备液 精密称取毛蕊花糖苷对照品80.80mg，加内标溶液制成每1mL含1.616mg的溶液，即得。
3．3 样品溶液取本品2g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿一石油醚(30—60℃)(4：6)的混合液100mL，水浴中提取至溶液近无色，弃去溶液，残渣挥尽溶剂，加甲醇90mL，水浴中提取至溶液近无色，分取甲醇液，置100mL量瓶中，用适量甲醇洗涤容器，溶液并人量瓶中，并定容至刻度，摇匀，精密量取50mL，置三角瓶中，减压浓缩至干，用20mL水分数次溶解残渣，加于已处理好的聚酰胺柱(玻璃柱，直径1.5 cm，聚酰胺2g，90—180目，水装柱)上。先用50mL水超声洗涤容器，加于柱上洗脱，弃去水液；再用10％ 乙醇溶液30 mL超声洗涤容器，加于柱上洗脱，弃去洗脱液，再用50％乙醇溶液100mL超声洗涤容器，加于柱上洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至干，残渣加甲醇溶解并定容至5mL，摇匀，精密吸取1.0 mL，置蒸发皿中蒸干，精密加入内标溶液4.0 mL，超声使溶解，0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。
4 线性关系
分别精密量取对照品储备液1，2，3，4，5，10mL，分置10mL量瓶中，加内标溶液稀释至刻度，摇匀，即得0.1616，0.3232，0.4848，0.6464，0.808，1.616mg/mL 系列浓度的对照品溶液，进样测定，测量峰面积值。以对照品与内标峰面积的比值作为纵坐标(Y)，以对照品的浓度(mg/mL )为横坐标(X)绘制标准曲线。经回归处理，得回归方程为：Y=0.3814X+0.3338 r=0.9993
结果表明，毛蕊花糖苷在0.1616—1.616mg/mL浓度范围内线性关系良好。
5 精密度试验
在上述色谱条件下，取上述0.4848mg/mL毛蕊花糖苷对照品溶液连续进样5次，毛蕊花糖苷与内标物的峰面积比的RSD=0.54％。
6 重复性试验
精密称取江西产样品2.0 g共5份，依法测定。含量的平均值为1.54％，RSD=1.7％(n=5)。
7 稳定性试验
取同一样品溶液(江西产)，放置0，1，2，4，12h，分别测定样品的含量，含量的平均值为1.55％，RSD=0.99％ 。
8 回收率
精密称取含量为1.54％ 江西产的样品1.0 g，精密加入0.1006mg/mL毛蕊花糖苷对照品溶液50mL，再加甲醇40mL，按样品提取、测定方法操作，测得平均回收率：96.8％，RSD：1.1％(n=5)。
9 样品测定
取样品溶液，按上述方法测定，从标准曲线中计算含量。结果浙江、浙江乐清、福建、江西产样品中毛蕊花糖苷含量(n=2)分别为0.45％，0.89％，1.69％，1.54％。
1O 讨论
10．1 运行缓冲体系的选择 按常规的MECC方法，首先选择了SDS体系和胆酸钠体系为运行缓冲体系，试验了不同浓度的SDS和胆酸钠及不同比例的添加剂(如硼砂，磷酸二氢钠，Tris盐，β-环糊精等)和有机改进剂(如甲醇、乙醇、正丙醇及乙腈等)，pH6—10。结果表明：SDS体系和胆酸钠体系均无法使主成分峰与其他成分峰达到分离要求。最后选择脱氧胆酸钠体系，以硼酸和磷酸二氢钠为添加剂，使主成分峰与其他成分峰达到分离要求，且分离时间较短，经过优化后，以50mmol/L硼酸溶液一50 mmol/L 磷酸二氢钠溶液一20 mmol/L脱氧胆酸钠溶液(用1 mol/L 氢氧化钠溶液调pH为8.5)分离效果最好。
10．2 运行缓冲液pH的选择运行缓冲液的pH既可改变溶质的结构，使溶质电离或呈中性状态又可改变电渗流的大小，因此，pH对CE分离有较大的影响。本文在保持其他条件不变的情况下改变pH(pH用1 mol/L氢氧化钠溶液调节)以考察pH对分离选择性的影响，见图2。结果表明在pH7.5—9范围内，主成分毛蕊花糖苷峰的迁移时间变化不大，但金丝桃苷(由金丝桃苷对照品定位)等黄酮类成分峰的迁移时间有较大的变化，pH为8.5时，主成分毛蕊花糖苷与金丝桃苷等黄酮类成分的分离较理想。
1O．3 脱氧胆酸钠浓度的影响在其他条件不变的情况下(50mmol/L硼酸溶液，50mmol/L磷酸二氢钠溶液，用1mol/L 氢氧化钠溶液调pH为8.5)，配制脱氧胆酸钠的浓度分别为1O，2O，3O，4Ommol/L 的运行缓冲液，考察脱氧胆酸钠浓度对分离选择性的影响。结果表明随着脱氧胆酸钠浓度的升高，对主成分毛蕊花糖苷的峰迁移时间影响不显著；但对其他黄酮类成分峰的迁移时间有较大的影响，迁移时间随脱氧胆酸钠浓度增加延长；电流值增大。结果以脱氧胆酸钠浓度为2Ommol/L时主成分毛蕊花糖苷与其他黄酮类成分达到基线分离，且分析时间较短。
11 小结
11．1 根据上述实验，最后确定“2”项下的电泳条件为最佳分离条件。在此条件下，毛蕊花糖苷出峰快，与内标及其他成分基线分离。
11．2 由于本品药用部位为全草，含有较多的叶绿素等成分，在制备样品溶液时，采用聚酰胺柱，达到纯化样品、保护毛细管柱的目的。
11．3 HPCE法由于其高效快速的特点，改善了分离效果，较HPLC法缩短了分析时间(HPLC法需用时约60
min)。
11．4 我们也建立了HPLC测定小野芝麻中毛蕊花糖苷含量的方法 ，结果浙江、浙江乐清、福建、江西产样品中毛蕊花糖苷含量(n=2)分别为0.41％，0.96％，1.76％，1.56％。HPLC法与HPCE法测定毛蕊花糖苷含量的结果基本一致，HPCE法可以作为一种有效手段来控制小野芝麻药材的内在质量。
l JIANG Shou—jan(蒋受军)，ZHU Bin(朱斌)，ZHANG Nan—ping(张南平)，et al。Pharmacognostic study of Galeobdolon chinense(小野芝麻的生药学研究)．China Tradit Herb Drugs(中草药)，2002，33(9)：848
来源：东方医药网