摘要:目的 利用高速逆流色谱从大黄总游离蒽醌中分离制备四种高纯度大黄蒽醌单体。方法 以总大黄蒽醌为原料，采用HSCCC分离，NMR鉴定，HPLC检测，制备大黄蒽醌单体。结果 通过两个体系，得到大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚和大黄酚四个单体。通过HPLC检测纯度均达到99%。结论 高速逆流色谱适用于制备高纯度的天然药物单体。
关键词：高速逆流色谱 大黄素 芦荟大黄素 大黄素甲醚 大黄酚
高速逆流色谱（High-Speed Counter-Current Chromatography HSCCC）是一种较新型的液－液分配色谱，由National Institute of Health, U.S.A的Ito博士1982年最先研制开发。这种基于液液分配原理的新技术是利用螺旋管的方向性与高速行星式运动相结合，产生一种独特的流体动力学现象，是两相溶剂在螺旋管中实现高效的接触、混合，从而达到溶质在两相中的分配、传递，在短时间内实现高速高效分离，并可以达到几千个理论塔板数。世界上已有多个国家开展了此项研究和应用。与普通的色谱技术相比它具有不产生不可逆吸附的优点，样品理论回收值可达到100%，也可以避免样品与固体载体表面接触而产生变性。HSCCC与其它液液分配体系的分离方法相比具有分离效率高，溶剂用量少，操作简便，应用范围广等优点。
目前，国内外对大黄的化学成分及生药和化学成分的药理研究比较多。研究表明大黄中的有效成分为蒽醌类衍生物，这些化合物有明显的抗菌、抗癌功效[1]。有关大黄蒽醌衍生物的分离纯化，国内外学者早年曾做了大量工作，但步骤复杂，不适于实际应用。虽有许多文献报道过各种分离方法，但都不是简便、系统的分离方法[2]。除了传统的分离方法外，张天佑使用分析型的HSCCC对大黄蒽醌进行了分离分析研究[3]。利用HSCCC制备高纯度的大黄蒽醌类物质的报道较少。
本文介绍了使用国产TBE-300A半制备型高速逆流色谱仪从大黄总游离蒽醌中分离制备高纯度大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚和大黄酚四种蒽醌化合物。
1 仪器与试剂
TBE-300A半制备高速逆流色谱仪（上海同田生化技术有限公司），进样圈20ml；8823A－紫外检测仪（北京市新技术应用研究所）；恒流泵（北京圣益通技术开发有限责任公司）；MultiTempIII恒温水浴槽(Pharmacia Biotech)；KQ-250B超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）。
DIONEX高效液相色谱仪NMR为中国科学院药物研究所测定游离大黄蒽醌（淮安市瑞雷生化制品有限公司）HPLC用甲醇为色谱级，其它试剂均为分析纯。
2 HSCCC分离制备
（一）HSCCC溶剂系统 体系1和体系2分别在分液漏斗中剧烈振摇后放置，将上下相分开，分别超声脱气20min。体系1：正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水：9-1-5-5；体系2：正己烷－乙醇－水：9－6－1.5。
（二）样品 游离大黄蒽醌加氯仿室温超声溶解后过滤，得滤液蒸干后，用少量上述溶剂体系20ml下相加热超声溶解，进样量较少为黄色透明液体，进样量较大的话为悬浮浑浊液。由于色谱柱中没有固体吸附剂，所以在一定范围内可以用悬浮液样品进样，不影响分离效果。
（三）方法 用泵以10ml/min流速将体系1上相引入HSCCC的分离柱中，柱温25℃，待柱子中充满上相后（300ml），停止泵上相。开动HSCCC，开始采用正转，转速880rpm，用恒流泵以2ml/min的流速泵入体系1下相（即流动相），待只有下相流出，说明分离柱中的上下相已达到平衡。此时高速逆流色谱分离体系以上相（轻相）为固定相，下相（重相）为流动相。此时上相保留为70%。流出的流动相导入紫外检测仪，检测波长254nm。记录仪基线稳定后，将处理过的样品进样。根据吸收峰分别收集馏分。
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作者：
2007-5-18