高效液相色谱法测定结肠安灌肠剂中芍药苷的含量

目的：应用高效液相色谱法对结肠安灌肠剂中芍药苷进行含量测定。方法：选用Hypersil ODS-2分析柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-0.05 mol^.L^-1磷酸二氢钾(13∶87)为流动相，检测波长为230 nm，流速1.0 mL^.min^-1。结果：线性范围为1.12～6.72 μg(r=0.999 99)，平均回收率为97.63%，RSD为0.85%。结论：本法简便、灵敏、准确。
关键词　高效液相色谱法　结肠安灌肠剂　芍药苷

结肠安灌肠剂由赤芍、青黛、儿茶、白芨等组成，具有清热解毒、收湿止泻、活血止血、祛腐生肌的功用，用于溃疡性及慢性结肠炎的治疗。我们采用高效液相色谱法对方中赤芍所含芍药苷进行含量测定，并进行了方法学考察，为该方建立了质量控制标准。
1　仪器与试药
　　Waters 590、740数据处理仪、U6K进样器,Hitachi紫外检测器。
　　乙腈为色谱用试剂，磷酸二氢钾为分析纯。
　　芍药苷对照品(购自中国药品生物制品检定所)。
2　色谱条件
　　色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(Hypersil ODS-2 5 μm 大连化学物理研究所)250 mm×4.6 mm;流动相：乙腈-0.05 mol^.L^-1磷酸二氢钾(13∶87)；检测波长：230 nm；柱温：室温；流速：1.0 mL^.min^-1；最小检测限：27.3 ng；理论塔板数：8 000。在此条件下，芍药苷与其它组分达到基线分离(见图1)。

图1　芍药苷对照品(a)、供试品(b)和阴性对照(c)色谱图
1.芍药苷

3　实验方法
3.1　选择性试验　按处方比例及样品制备方法，制备不含赤芍药材的阴性样品，按照样品测定项下的方法进行测定，结果(见图1)表明无阴性干扰。
3.2　线性关系考察　精密吸取对照品溶液5，10，15，20，25，30 μL依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，芍药苷量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：
Y=40.92X+3.78　r=0.999 99
芍药苷在1.12～6.72 μg之间呈良好的线性。
3.3　精密度试验　精密吸取同一对照品溶液，重复进样6次，测定芍药苷面积，RSD=0.94%。
3.4　重现性试验　按照含量测定的方法，对同一样品测定6次，计算芍药苷含量为2.25 mg^.g^-1，RSD=1.4%。
3.5　加样回收率试验　取已知含量的样品，分别精密加入芍药苷对照品溶液适量，按照样品测定项下制备供试品溶液，按上述色谱条件测定芍药苷峰面积。平均回收率为97.63%(n=6)，RSD=0.85%。

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