|
摘要：目的 建立一种用胶束动电毛细管色谱法测定去痛片中各组分含量的方法。方法 用硼酸·氢氧化钠·十二烷基磺酸钠为缓冲液进行分离，以茶碱为内标，254 nm为测定波长。结果 样品中咖啡因、氨基比林、非那西丁、苯巴比妥等4组分完全分离且呈良好线性关系，其加样回收率为98.26%～101.87%。结论 本方法简便、准确，可作为该制剂各组分含量的测定方法。
中图分类号：R927.2; R971.1 文献标识码：A 文章编号：1000-2588（2000）04-0331-02
去痛片为最常用的解热镇痛抗风湿药，是一种含氨基比林、非那西丁、咖啡因和苯巴比妥4种组分的复合制剂。其质量控制一直采用容量分析法，操作繁琐，分离提取耗费大量有机溶剂。有报道可用动态规划[1]、褶合曲线分析[2]等方法，不经分离同时测定去痛片中4种组分的含量。作者应用胶束动电毛细管色谱法[3]成功地分离并测定了去痛片中4种组分，结果准确，操作简便快速。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
HP3D Capillary Electrophoresis System (Hewlett-Packard，美国)，配置HP化学工作站，二极管阵列紫外检测器。熔融石英毛细管（Hewlett-Packard，64 cm×75 μm）。
1.2 试剂
氨基比林、非那西丁、咖啡因和苯巴比妥对照品及茶碱由广东省药检所、广州市药检所提供；去痛片为市售药品；十二烷基磺酸钠（SDS）为化学纯，硼酸、氢氧化钠为分析纯。
2 方法与结果
2.1 电泳条件的建立
配制20 mmol/L硼酸液、20 mmol/L氢氧化钠液和0.4 mol/L SDS液。将3种溶液按不同的体积比进行组合选择，得出运行缓冲液硼酸·氢氧化钠·SDS最佳组合体积比为150∶150∶13（pH 10）。其它操作条件为：柱温25 ℃；运行电压15 kV，极性为正极到负极；进样压力2.96 Pa，时间3 s；检测波长254 nm；样品溶剂为水。样品溶液和运行缓冲液均经过0.45 μm微孔滤膜过滤。使用毛细管前，先用0.1 mol/L氢氧化钠液冲洗4 min，再用水冲洗2 min，最后用运行缓冲液冲洗平衡3 min。每次测定前重复这一过程。
2.2 内标的选择
在选定的电泳条件下，茶碱的迁移时间介于去痛片各组分的迁移时间之间，峰形良好且分离完全，故选择茶碱作为内标物。
2.3 线性范围的确定
分别精密称取各对照品适量，置同一量瓶中，加温水适量，超声溶解并稀释成一系列梯度浓度溶液，各稀释液均含相同浓度的茶碱内标物。按选定的电泳条件进样测定，以对照品与内标峰面积的比值为纵坐标(y)，以各对照品的浓度为横坐标(x)。各组分的线性范围、回归方程及相关系数见表1。
表1 标准曲线数据(n=5)
Tab.1 Data of standard calibration curves (n=5)
|
Component |
Linear range
（μg/ml） |
Regression equation |
r |
|
Caffeine |
42.2～189.9 |
y=2.565×10-2+3.391×10-3x |
0.9989 |
|
Aminopyrine |
125.0～562.5 |
y=1.840×10-2+5.565×10-3x |
0.9991 |
|
Phenacetin |
125.6～565.2 |
y=1.092×10-1+9.306×10-3x |
0.9997 |
|
Phenobarbital |
18.2～81.9 |
y=7.512×10-3+4.556×10-3x |
0.9982 |
2.4 精密度试验
本实验条件下氨基比林、非那西丁、咖啡因和苯巴比妥4组分及内标的迁移时间均在6～9 min之内（图1）。其迁移时间的相对标准差RSD(%)分别为：0.37、1.15、0.69、1.06、0.78；相对峰面积的RSD(%)分别为：0.93、1.19、1.12、1.35（n=5）。
图1 样品的电泳谱图
Fig.1 Capillary electropherogram of the sample
1. Caffeine; 2. Aminopyrine; 3. Phenacetin;
4. Phenobarbitone; 5.Theophylline
2.5 样品测定
取去痛片10片，精密称定后，研细。精密称取片粉适量（约相当于1片重），置于200 ml量瓶中，加温水适量，超声溶解后，加水至刻度，摇匀，过滤。精密量取滤液适量，加入相同浓度的内标液。按已选定的实验条件进样测定。3批样品用本法及中国药典法的测定结果见表2。
表2 样品测定结果
Tab.2 Determination of samples
|
No. |
HPCE method |
Chinese pharmacopoeia method |
|
Ami |
Phena |
Caf |
Pheno |
Ami |
Phena |
Caf |
Pheno |
|
1 |
98.26 |
97.91 |
96.77 |
97.01 |
98.04 |
98.11 |
97.13 |
97.22 |
|
2 |
100.53 |
98.72 |
97.53 |
96.78 |
99.89 |
98.80 |
97.19 |
97.03 |
|
3 |
97.18 |
96.35 |
95.74 |
96.77 |
97.00 |
96.55 |
95.37 |
96.41 |
Ami:Aminopyrine; Phena:Phenacetin; Caf:Caffeine; Pheno:Phenobarbital
2.6 加样回收试验
精密称取适量的4种对照品，分别加到已知含量的去痛片样品细粉中，按样品测定的方法制备样液并测定。4组分的加样回收率(%)和RSD(%)(n=3)分别为：氨基比林98.26、1.11；非那西丁100.84、0.73；咖啡因100.84、1.20；苯巴比妥101.87、1.45。
3 讨论
本试验观察了SDS浓度对组分迁移时间的影响。当SDS浓度在8～20 mmol/L时，所有组分的迁移时间均随SDS浓度的增加而增加。本实验所用SDS浓度约为17 mmol/L。
3.2 本试验观察了运行缓冲液pH对组分迁移时间的影响。 当缓冲液pH=10时，各组分分离完全。此缓冲液硼酸、氢氧化钠、SDS最佳组合的体积比为150∶150∶13。
由于操作简便和快捷，随着毛细管色谱仪的日渐发展和推广应用，本法可作为去痛片生产中一种可取的质量控制法。
作者简介：王桂芳（1948-），女，安徽金寨人，1974年毕业于第二军医大学，教授，主任药师，电话：85143910
王桂芳（第一军医大学珠江医院药剂科, 广东 广州 510282）
张守尧（第一军医大学珠江医院药剂科, 广东 广州 510282）
贺巍（第一军医大学珠江医院药剂科, 广东 广州 510282）
参考文献：
|