高效毛细管电泳法研究美托洛尔、艾司洛尔和维拉帕米的对映体的手性分离

摘要　

目的：用高效毛细管电泳法分离美托洛尔、艾司洛尔和维拉帕米的对映体的手性分离。方法：在65mmol^.L^-1磷酸盐缓冲溶液中加入5.5mmol^.L^-1羧甲基-β-CD(CM-β-CD)手性选择剂，pH=4.5，紫外λ 212nm检测。

结果：美托洛尔、艾司洛尔和维拉帕米的对映体得到基线手性分离。

结论：此方法分析速度快，手性分离效果好，可用于上述药物对映体的临床研究。

1　材料和方法

1.1　药品与试剂
美托洛尔、艾司洛尔和维拉帕米(河北省药品检验所)；CM-β-CD和β-CD(Sigma)；三羟甲基氨基甲烷(Tris)、氢氧化钠和磷酸为AR级(上海化学试剂厂)。

1.2　仪器与实验条件
HPCE：H-1型高效毛细管电泳仪(河北大学)，石英毛细管柱57cm×75μm，有效长度49cm;检测波长212nm，工作电压为20.0kV。进样和冲洗均通过气压进样装置，进样压力与时间为3.0kPa×6s，冲洗压力为0.4MPa。

1.3　试验方法
1.3.1　背景电解质(BGE)的配制　吸取一定体积0.1mol^.L^-1H₃PO₄，滴加0.1mol^.L^-1Tris至所需pH值，加入适量蒸馏水得到一定浓度的H₃PO₄-Tris缓冲溶液。取适量β-CD或CM-β-CD加入缓冲溶液中，即得含一定手性选择剂浓度的BGE溶液。

1.3.2　样品溶液的配制　称取一定量的样品，用0.10mol^.L^-1盐酸溶解，最后用背景电解质溶液稀释至0.20mg^.ml^-1

2　结　果

2.1　手性选择剂类型对手性分离效果的影响
分别以β-CD和CM-β-CD作为手性选择剂，研究手性选择剂类型对手性分离效果的影响。结果发现β-CD仅使美托洛尔、艾司洛尔和维拉帕米的对映体得到部分分离；而CM-β-CD使美托洛尔、艾司洛尔和维拉帕米的对映体得到完全分离。这说明CM-β-CD比β-CD对上述药物具有更强的手性识别能力，因此本实验重点讨论CM-β-CD手性选择剂对上述3种药物的手性分离作用。

2.2　pH对手性分离效果的影响
通过改变BGE中H₃PO₄-Tris缓冲溶液的pH值研究其对β-CD及CM-β-CD手性分离的影响。对于β-CD，pH=2.5时，上述3种药物的手性分离效果最好；对于CM-β-CD，pH=4.5时，3种药物的手性分离效果最好。图1为以CM-β-CD为手性选择剂时，pH对手性分离效果的影响。

图1　pH值对分离度(Rs)的影响
—○—－美托洛尔：65mmol^.L^-1H₃PO₄-Tris,5.5mmol^.L^-1CM-β-CD；—■—－艾司洛尔：65mmol^.L^-1H₃PO₄-Tris,5.5mmol^.L^-1CM-β-CD；—△—－维拉帕米：65mmol^.L^-1H₃PO₄-Tris,5.5mmol^.L^-1CM-β-CD

2.3　缓冲溶液浓度对分离效果的影响
以CM-β-CD为手性选择剂，研究了H₃PO₄-Tris(pH=4.5)缓冲溶液浓度对美托洛尔、艾司洛尔和维拉帕米的手性分离效果的影响，实验发现缓冲溶液的最佳使用浓度为65mmol^.L^-1。

2.4　手性选择剂用量对手性分离效果的影响
在65mmol^.L^-1H₃PO₄-Tris(pH=4.5)缓冲溶液中加入不同浓度的手性选择剂，以考察手性选择剂用量对手性分离效果的影响。结果表明，以β-CD作为手性选择剂时，其最佳用量为12mmol^.L^-1；以CM-β-CD作为手性选择剂时，其最佳用量为5.5mmol^.L^-1。

3　讨　论

　　本实验采用HPCE，通过向BGE中加入手性选择剂的方法对美托洛尔、艾司洛尔和维拉帕米等药物对映体的手性分离进行了研究，结果表明，CM-β-CD比β-CD对上述药物具有更强的手性识别能力。β-CD仅使上述3种药物的对映体得到部分拆分，其最佳分离条件是：BGE溶液75mmol^.L^-1H₃PO₄-Tris，β-CD12mmol^.L^-1，pH2.5;CM-β-CD使上述3种药物的对映体得到完全拆分，其最佳分离条件是：BGE溶液65mmol^.L^-1H₃PO₄-Tris,CM-β-CD 5.5mmol^.L^-1，pH4.5。本实验所建立的方法可以用于上述药物对映体的药代动力学和临床研究。图2为以CM-β-CD作为手性选择剂在最佳分离条件下获得的谱图。

图2　美托洛尔、艾司洛尔和维拉帕米对映体手性分离谱图
a-美托洛尔；b-艾司洛尔；c-维拉帕米

作者单位：李学仁　程庆春　杨跃伟　张云斌（保定071000解放军第二五二医院麻醉科）
尚素芬　王洪（保定071002河北大学化学系）

参考文献