点击显示 收起
摘要 目的:探讨胶束纸色谱法在分离、鉴别黄酮类及其水溶性衍生物中的应用。
槲皮素(quercetin)、金雀异黄素(genistein)同属于黄酮类化合物,具有广泛的抗肿瘤、抗血小板、抗氧化等药理作用[1~2]。因不溶于水,使其在研究和应用中受到限制。本研究组将槲皮素、金雀异黄素转化为水溶性的硫酸酯钠并探讨了它们的生物活性变化[3]。文献报道 1 材料与方法 1.1 药品与试剂 槲皮素(Q)、金雀异黄素(G)均为美国Sigma公司产品;槲皮素-7-硫酸酯钠(Q1)、槲皮素-7, 1.2 实验方法 精确配制SDS浓度为0.0081,0.01,0.02,0.03,0.04,0.05mol.L-1的水溶液作为展开剂(0.0081mol.L-1为SDS的CMC)进行实验,并在一定浓度下依次分别加入体积分数为2%,4%,6%,8%的甲醇、异丙醇、正戊醇、正丁醇、冰乙酸。新华三号滤纸切割成2.5cm×12cm的纸条,毛细管点样。药品溶解在甲醇中,展开前层析缸密闭,以展开剂蒸气饱和1h,上行法展开约10cm左右。 1.3 显色 以10g.L-1FeCl3溶液喷洒后,各药品点显紫黑色,以初步鉴定样品酚型结构的存在。在365nm的紫外光照射下,对原始样品点、非SDS溶液展开并经50g.L-1AlCl3甲醇溶液喷洒的样品迁移点、SDS胶束水溶液展开并经50g.L-1AlCl3甲醇溶液喷洒的样品迁移点,3种不同情况下的荧光表现进行比较。结果见表1,图1,图2。 1.4 数据处理 每次做两组平行实验,测2次,共4个Rf值,求其平均值及标准差。以SDS浓度为横坐标,相应浓度的Rf为纵坐标,求出直线回归方程,所有数据均进行t检验。 2 实验结果 2.1 胶束浓度对药品迁移的影响 以0.0081,0.01,0.02,0.03,0.04,0.05mol.L-1的SDS胶束水溶液作展开剂进行实验,常温下得结果见表1。 表1 药品在不同浓度的SDS水溶液中的Rf值. |
浓度 |
Q |
Q1 |
Q2 |
G |
G1 |
G2 |
(mol.L-1) |
(P<0.05) | |||||
0.0081 |
0.08±0.012 |
0.14±0.041 |
0.48±0.031 |
0.34±0.056 |
0.47±0.035 |
0.85±0.031 |
0.01 |
0.08±0.021 |
0.13±0.015 |
0.50±0.058 |
0.37±0.036 |
0.46±0.05 |
0.80±0.032 |
0.02 |
0.14±0.042 |
0.11±0.008 |
0.46±0.057 |
0.64±0.016 |
0.44±0.042 |
0.77±0.031 |
0.03 |
0.23±0.007 |
0.11±0.012 |
0.43±0.056 |
0.76±0.04 |
0.41±0.016 |
0.73±0.041 |
0.04 |
0.27±0.025 |
0.10±0.013 |
0.37±0.05 |
0.86±0.034 |
0.56±0.006 |
0.78±0.008 |
0.05 |
0.29±0.01 |
0.11±0.008 |
0.35±0.042 |
0.89±0.029 |
0.44±0.021 |
0.73±0.018 |
图1 Q、Q1、Q2间的△Rf值与SDS浓度的关系 |
图2 G、G1、G2间的△Rf值与SDS浓度的关系 从图1可见,随着胶束浓度的增加,Q和G的Rf值增加,且G的Rf值增幅尤其显著;但Q1,Q2,G1,G2则随胶束浓度增加,Rf值均呈下降趋势,迁移速度减慢。样品间的分离效果通过其△Rf值能够充分体现出来,△Rf值越大,则反映样品间的分离效果越好,从图1可见,△Rf(QQ2)值和△Rf(Q1Q2)随SDS浓度增加而降低,在低浓度下有较大的△Rf值,但△Rf(QQ1)随SDS浓度呈曲线状态,在较大的SDS浓度情况下有较好的分离效果。 2.2 有机改性剂对药物迁移的影响 单独使用SDS溶液作为展开剂,所有样品均有不同程度的拖尾现象存在,且随SDS溶液浓度的增大,拖尾现象愈明显,Q,G二样品的拖尾情况尤其严重。 2.3 胶束水溶液对药物荧光的影响 各样品在不同展开剂下受紫外光照射所表现的荧光情况,见表2。 表2 槲皮素、金雀异黄素及其衍生物在不同展开剂下的荧光比较(365nm) |
展开剂 |
Q |
Q1 |
Q2 |
G |
G1 |
G2 | |
甲醇溶液 |
黄色 |
黄色 |
黄色 |
紫红色 |
紫红色 |
紫红色 | |
非SDS溶液+ |
淡黄色 |
土黄色 |
黄绿色 |
淡兰绿色 |
淡黄绿色 |
青兰色 | |
5%AlCl3 |
|
|
|
|
|
| |
SDS溶液+ |
亮绿色 |
亮橙黄色 |
亮橙黄色 |
淡兰绿色 |
黄绿色 |
亮青兰色 | |
5%AlCl3 |
|
|
|
|
|
|
3 讨 论 Armstrong等[6]认为在胶束流动相中有静电、疏水、立体3种效应在起作用,由此使胶束溶液具有独特的选择性,可同时分离亲水物质和疏水物质。Q为五羟基黄酮醇,G为三羟基异黄酮,皆不溶于水,但Q1,Q2,G1,G2则均为溶于水的硫酸酯钠衍生物。因此,选择合适浓度的SDS胶束水溶液,就能够有效地分离和鉴别槲皮素、金雀异黄素及其硫酸酯钠衍生物。 *本课题为广东省重点学科专项基金[粤高教科(1996)4号]和广东医学院青年科学基金[广东医科青9704]共同资助项目 作者单位:佘戟 莫丽儿 梁念慈 (湛江524023广东医学院化学教研室) 参考文献 [1] Ioku K,Tsushida T,Takei et al.Antioxidative avtivity of quercetin and quercetin monoglucoside in solution and phospholipid bilayers.Biochim Biophys Acta,1995,1234(4):99. (收稿:1998-03-17) |