毛细管气相色谱法测定吡喹酮中5种有机溶剂残留量

上海市药品检验所　200233

　　吡喹酮为广谱抗蠕虫药。主要用于日本、埃及和曼氏3种血吸虫病，其特点是剂量小，疗程短，疗效好，代谢快，毒性低。于1975年由Seubert等首先合成^［1］。国内于1982年正式投产。除中国药典收载外，USPⅩⅩⅢ、IPⅢ均有收载。由于生产工艺接触到乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、苯等5种溶剂，故对此5种溶剂的残留量加以检测有利于产品质量的提高，对改进生产工艺也有指导作用。本文采用毛细管气相色谱法同时对此5种残留溶剂进行测定，操作简便，重现性好，结果准确可靠。
1　仪器与试药
HP5890毛细管气相色谱仪，HP3396A积分仪，氢火焰检测器。所用试剂均为分析纯级。
吡喹酮为国内产品，批号97008,97009,97010。
2　实验方法与结果
2.1　色谱条件　CP-Sil-5CB(25m×0.53mm)石英毛细管柱；载气为N₂，柱头压：13.8kPa；分流气:12mL/min；柱温：50℃(7min),60℃/min 升至200℃，保持5min。进样口温度:200℃；氢火焰检测器温度：260℃；检测器量程:Range=5；进样量:1.0μL。乙醇与丙酮的分离度为2.95。
2.2　线性范围及标准曲线　用N,N-二甲基乙酰胺分别制备含乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、苯均为5、10、15、20、 30μg/mL的对照品溶液，在上述色谱条件下，分别进样1.0μL，色谱图见图1，乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、苯的保留时间分别为2.076、2.267、2.655、3.905、5.278min。以对照品浓度C为横坐标，对照品峰面积A为纵坐标进行线性回归，结果见表1。

图1　对照品溶液的色谱图
a.乙醇　b.丙酮　c.二氯甲烷　d.乙酸乙酯　e.溶剂杂质　f.苯

表1　线性范围及回归方程

对照品

线性范围
(μg/mL)

回归方程

r

乙醇　　

5～30

C=0.4593+2.546×10^-3A

0.9993

丙酮　　

5～30

C=-0.5866+2.367×10^-3A

0.9994

二氯甲烷

10～30

C=-0.2505+7.197×10^-3A

0.9991

乙酸乙酯

5～30

C=-1.1065+2.744×10^-3A

0.9992

苯　　　

5～30

C=-0.5727+9.957×10^-4A

0.9990

2.3　精密度试验　以对照品溶液(10μg/mL)连续重复进样5次，计算对照品乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、苯峰面积的RSD(%)分别为7.9、7.1、6.5、7.7、6.6。
2.4　最低检测限试验　用对照品溶液(10μg/mL)逐步稀释，直至未检测到明显的峰为止(以信号大于噪声的2倍为检出)。结果对照品乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、苯的最低检测限(ng)为0.125、0.125、1.0、0.667及0.125。
2.5　回收率试验　取吡喹酮样品(批号97009)约100mg，加入含对照品10μg/mL的溶液1.0mL，溶解混合，进行测定。另取一份样品直接测定有机溶剂的残留量。结果见表2。

表2　回收率试验结果(n=6)

对照品

平均回收率(%)

RSD(%)

乙醇　　

93.93

1.9

丙酮　　

107.98

3.8

二氯甲烷

100.02

4.8

乙酸乙酯

95.22

5.9

苯　　　

94.00

5.2

2.6　样品测定　取3批吡喹酮样品，各约100mg,加N,N-二甲基乙酰胺1.0mL，溶解混匀，一式二份，按上述色谱条件以外标法进行测试，对照溶液中各组分的浓度均为10μg/mL，取2份结果的平均值作为测试结果。结果见表3。色谱图见图2。结果表明，样品中乙醇、乙酸乙酯、苯均未检出，二氯甲烷残留量均小于0.01%，也符合中国药典1995年版之规定；丙酮残留量均大于0.01%，中国药典1995年版对丙酮量未作规定，但丙酮的残留量与药物的质量有关，必须加以控制。

表3　3批样品的测定结果(%)

批号

乙醇

丙酮

二氯甲烷

乙酸乙酯

苯

97008

未检出

0.0304

0.0063

未检出

未检出

97009

未检出

0.0243

0.0050

未检出

未检出

97010

未检出

0.0281

0.0060

未检出

未检出

3　结果讨论
吡喹酮在N,N-二甲基乙酰胺中易溶，故选择N,N-二甲基乙酰胺为溶剂。但由于N,N-二甲基乙酰胺本身不稳定，放置时间过长会产生大量杂质峰干扰测定，故宜选取最近生产的批号或重蒸馏处理过的N,N-二甲基乙酰胺作溶剂，图1中峰e为溶剂中杂质，此杂质在本测定方法中无干扰。在测定线性范围时，对照品浓度达40μg/mL时，线性变差。二氯甲烷由于最低检测限较高(1.0ng)，其5μg/mL这一点不在线性范围内，故二氯甲烷的线性范围为10～30μg/mL，乙醇、丙酮、乙酸乙酯、苯的线性范围均为5～30μg/mL。　　

图2　样品溶液的色谱图
b.丙酮　c.二氯甲烷　e.溶剂杂质

　　按中国药典1995年版二部对有机挥发性杂质检查的色谱条件，二氯甲烷和丙酮峰重叠，此色谱条件不能同时测定吡喹酮中5种残留溶剂，而本方法对5种有机溶剂的分离良好，乙醇与丙酮的分离度为2.95，丙酮与二氯甲烷的分离度为6.28。
中国药典1995年版二部对有机挥发性杂质的检查作出了规定，精密度RSD≤10%^［2］。本方法连续进样5针，各对照品峰的RSD均小于8.0%，方法精密度符合中国药典的要求。最低检测限均在1ng以下，回收率也能满足要求。故本方法适用于吡喹酮中此5种有机溶剂的检测。

参考文献

1　中国药典1990年版二部注释.262
2　中国药典.1995.二部：附录59

(本文于1997年5月20日收到)