摘 要 目的:建立神女乐洗液的质量控制方法。方法:采用薄层色谱法对其中的苦参、蛇床子进行定性鉴别;并以萘为内标,应用气相色谱法对其中的薄荷脑进行了定量测定。结果:线性范围在0.06312~0.3156μg,平均回收率97.16%(n=5),RSD为0.90%。结论:鉴别和含量测定方法中各阴性对照均无干扰,含量测定方法灵敏度高,重现性好,可作为该制剂的质量控制标准。 关键词:神女乐洗液 薄层色谱法 气相色谱法 苦参 蛇床子 薄荷脑
神女乐洗液是由苦参、地肤子、薄荷油、蛇床子等中药经加工而成的外用液体制剂,具有清热燥湿,杀虫止痒功能,临床上用于湿热带下,皮肤瘙痒症的治疗。为了有效控制神女乐洗液的内在质量,采用TLC法分别对制剂中的主要药物苦参、蛇床子进行了定性鉴别,并应用气相色谱法测定了样品中薄荷脑的含量,为神女乐洗液的质量控制提供了实验依据。
1 仪器与试药 日本岛津GC-9A气相色谱仪;岛津C-R2A数据处理机。槐定碱,薄荷脑对照品(中国药品生物制品检定所);硅胶G(青岛海洋化工厂);神女乐洗液(广西右江制药厂);试剂均为分析纯。药材经黄燮才主任技师鉴定。
2 TLC定性鉴别 2.1 薄层板制备 取硅胶G,加0.5%羧甲基纤维素钠溶液,研匀,均匀涂布于玻璃板上,晾干,105℃活化1h,置干燥器中备用。 2.2 供试品溶液制备 取本品10ml,加氨试液调pH值至9~10,加氯仿15ml,振摇提取,分取氯仿液,于水浴上蒸干,残渣加氯仿3ml使溶解,滤过,滤液作为供试品溶液。 2.3 对照品溶液制备 取槐定碱对照品适量,加氯仿制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。 2.4 蛇床子对照药材溶液的制备 取蛇床子对照药材1g,加氯仿15ml及氨试液1ml,冷浸1h,时时振摇,滤过,滤液于水浴上蒸干,残渣加氯仿3ml使溶解,滤过,滤液作为对照药材溶液。 2.5 阴性对照溶液制备 按处方比例去除苦参或蛇床子,同供试品溶液制备方法分别制得缺苦参或蛇床子的阴性对照溶液。 2.6 苦参的鉴别 吸取供试品溶液、缺苦参的阴性对照溶液、槐定碱对照品溶液各4μl,分别点于同一薄层板上,以氯仿-甲醇-浓氨试液(30∶3∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾溶液。供试品色谱中,与对照品色谱在相应位置上有相同的橙红色斑点,缺苦参的阴性对照溶液无干扰,结果见图1。
图1 苦参TLC图谱 1-供试品溶液;2-槐定碱对照品液;3-阴性对照液
2.7 蛇床子的鉴别 吸取供试品溶液、缺蛇床子的阴性对照溶液、蛇床子对照药材溶液各10~15μl,分别点于同一薄层板上,以石油醚(60~90℃)-醋酸乙酯(7∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸溶液,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的蓝色荧光斑点,缺蛇床子的阴性对照溶液无干扰,结果见图2。
图2 蛇床子TLC图谱 1-供试品溶液;2-蛇床子药材液;3-阴性对照液
3 薄荷脑含量测定 3.1 色谱条件 色谱柱:10% PEG-20M,0.3mm×2m;柱温:118℃;进样口与检测器温度:210℃;气流:N2 30ml/min,H2 60ml/min,空气400ml/min;氢火焰检测器。 3.2 标准曲线的制备 3.2.1 内标溶液配制 精密称取萘52.4mg,置50ml量瓶中,加石油醚(60~90℃)使溶解并稀释至刻度,作为内标溶液。3.2.2 薄荷脑对照品溶液的配制 精密称取薄荷脑对照品49.2mg,置50ml量瓶中,加石油醚(60~90℃)使溶解并稀释至刻度,作为原液备用。精密吸取原液2ml,加入内标溶液2ml,加石油醚(60~90℃)稀释至刻度,摇匀,即得。 3.2.3 测定方法 精密吸取薄荷脑原液1,2,3,4和5ml,置50ml量瓶中,加石油醚(60~90℃)稀释至刻度,摇匀。以给定的色谱条件进样3μl,以薄荷脑峰面积与内标峰面积之比为横坐标,薄荷脑含量为纵坐标,绘制标准曲线,其回归方程为:Y(μg)=0.1612944X+0.0007681,r=0.99999。 在0.06312~0.3156μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。 3.3 干扰实验 按处方规定的配比,制成不含薄荷油的样品,按样品测定项下操作,在给定的条件下分析,试验结果表明,空白样品对测定无影响,结果见图3。
图3 干扰试验气相色谱图 1-溶剂色谱峰;2-样品色谱峰(不加内标);3-样品色谱峰(加内标);4-标准品色谱峰(加内标);5-空白样品色谱峰;a-薄荷脑;b-萘(内标)
3.4 精密度试验 取样品供试液进样5次,测定薄荷脑含量,结果其RSD为0.66%。 3.5稳定性试验 取样品供试液每隔2h进样一次,共测定 5次,结果薄荷脑含量平均为0.197mg/ml,RSD为1.21%,表明样品溶液在8h内稳定。 3.6 重现性试验 取同一批样品5份,按样品提取方法同法提取,测定薄荷脑的含量,结果平均含量为0.194%,RSD为1.62%,表明重现性良好。 3.7回收率试验 精密吸取样品15ml,精密加薄荷脑原液(1.052mg/ml)2ml,按样品提取方法制得供试品溶液,测定薄荷脑含量,结果平均回收率为97.16%,RSD为0.90%,见表1。
表1 加样回收率测定结果
编号 |
样品量/mg |
加入量/mg |
测得量/mg |
回收率/% |
1 |
2.913 |
2.104 |
4.956 |
97.1 |
2 |
2.913 |
2.104 |
4.944 |
96.5 |
3 |
2.913 |
2.104 |
4.983 |
98.4 |
4 |
2.913 |
2.104 |
4.937 |
96.2 |
5 |
2.913 |
2.104 |
4.966 |
97.6 |
3.8 样品测定 精密吸取供试品15ml,加石油醚(60~90℃)提取4次(15,10,10和10),合并提取液,置于50ml量瓶中,加石油醚(60~90℃)稀释至刻度,作为供试品溶液。吸取3μl,进样。以内标法计算,结果见表2。
表2 样品测定结果
批 号 |
薄荷脑含量/mg.ml-1 |
RSD/% |
950420 |
0.194 |
1.62 |
950422 |
0.213 |
1.76 |
950425 |
0.205 |
1.98 |
980602 |
0.267 |
0.97 |
980702 |
0.260 |
0.42 |
4 讨 论 4.1 在苦参的鉴别中,曾试用苦参碱作为对照品,但在展开后发现,阴性对照在与苦参碱对照品色谱相应位置有一相同颜色的斑点,故最后采用槐定碱作为对照品。试验中,曾比较了不同的展开系统,如氯仿-甲醇-浓氨试液的不同比例以及甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液(20∶20∶3∶1)、苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)等,结果以本文所选用的展开系统较好,斑点完全分离,Rf值适中。 4.2 在蛇床子的薄层鉴别中,曾试用了苯-醋酸乙酯(9∶1)、正己烷-醋酸乙酯(8.5∶1.5)等展开系统,结果以本文所用的展开系统较好,斑点能较好分离,Rf值适中。若展开后直接置紫外光灯(365nm)下检视,虽然供试品色谱与对照药材色谱有相对应的紫色斑点,但其它斑点较多,喷1%香草醛硫酸溶液后,再置紫外光灯(365nm)下检视,则其余大部分斑点不再显荧光,对确定对应斑点较好,故本文确定以喷显色剂后再检识。 4.3 薄荷脑含量测定中,曾用乙醚作为溶剂,结果色谱分离效果比用石油醚(60~90℃)要好,但乙醚易挥发,使测定结果不稳定,所以换用石油醚作溶剂提取,结果稳定性较好。 4.4 本文所用方法简便、快速,重现性和专属性较好,可作为本品的质量控制指标。
作者单位:南宁 530021 广西药品检验所
中国现代应用药学1999年第16卷第6期 |