HPLC法测定盐酸格拉司琼片剂的含量

摘要　目的：采用高效液相色谱法测定盐酸格拉司琼片中盐酸格拉司琼的含量。方法：用Spherisorb-CN柱(250 mm×4.6 mm)，以甲醇-0.05 mol.L-1醋酸钠缓冲液-三乙胺(70∶30∶0.25，用冰醋酸调pH至7)为流动相，用紫外检测器于301 nm波长处检测。结果：线性范围为0.005～0.015 mg.mL-1(r=0.999 6)。平均回收率为99.44%，RSD=1.16%(n=3)。检测限为0.05 μg.mL-1。结论：本法具有操作简便，分析快速准确、干扰小等优点。
关键词　高效液相色谱法　盐酸格拉司琼
　　盐酸格拉司琼(商品名：Kytril)是具有高度选择性的、强有力的5-HT3受体拮抗剂。用于高度催吐化疗药物的止吐，解决化疗、放疗过程中重要的副反应，从而改善患者生活质量。国内已有数家研制成功，其原料、片剂及注射剂均获卫生部批准。
　　本文采用HPLC法测定盐酸格拉司琼片的含量，操作简便，结果准确可靠，辅料及降解物等不干扰主药测定。
1　仪器与试药
　　日本岛津高效液相色谱仪(LC-10AT高压泵，SPD-10A紫外检测器，WDL-95色谱工作站)，日本岛津UV-2401PC紫外分光光度计。
　　甲醇、醋酸钠、三乙胺均为分析纯。
　　盐酸格拉司琼对照品，自研原料精制，含量99.82%；盐酸格拉司琼片，自研，批号：980514，980521，980525。
2　色谱条件
　　色谱柱：Spherisorb-CN(250 mm×4.6 mm)流动相：甲醇-0.05 mol.L-1醋酸钠缓冲液-三乙胺(70∶30∶0.25，用冰醋酸调pH至7)流速：1 mL.min-1；检测波长：301 nm，理论板数：4 537。
3　实验方法与结果
3.1　线性关系　精密称取盐酸格拉司琼对照品12.5 mg，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL分别置100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。各取溶液10 μL分别注入色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，由峰面积(A)对溶液浓度(C)线性回归，得回归方程(n=5)：

A=2.469×104C+2.624×104　r=0.999 6

盐酸格拉司琼在0.005～0.015 mg.mL-1浓度范围内呈线性。
3.2　回收率测定　分别精密称取盐酸格拉司琼对照品8，10，12 mg置100 mL容量瓶中，加入处方量辅料(相当于盐酸格拉司琼10 mg)，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取10 mL置100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度作为供试品溶液。分别量取10 μL注入色谱仪，量取峰面积，计算回收率。经实验测得平均回收率为99.44%RSD为1.16%，n=3。
3.3　精密度实验　在选定的色谱条件下，对照品溶液连续进样5次，按峰面积计算RSD为0.85%。
3.4　稳定性试验　对照品溶液置无色透明容量瓶中，放置12 h，对照品溶液峰面积基本不变，按峰面积计算RSD为1.14%，溶液稳定。
3.5　专属性考察　将本品置120 ℃高温下4 h，进行破坏性试验，然后用水配制成每1 mL含盐酸格拉司琼0.01 mg溶液，取10 μL，在预定灵敏度下(用预试溶液调节)，注入液相色谱仪中，考察降解溶液的分离状况；同时改变流动相比例，延长保留时间，对降解溶液进行分析，也未发现有新的杂质峰出现。试验结果表明，盐酸格拉司琼与其降解物质的分离效果令人满意(图1)，空白溶剂(水)、辅料在此条件下无干扰。


图1　对照品(A)与样品降解(B)色谱图
1.格拉司琼

3.6　样品含量测定　取本品研细，精密称取细粉适量(约相当于盐酸格拉司琼1 mg)，置100 mL容量瓶中，加水适量，充分振摇，溶解，用水稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，以续滤液作为供试品溶液。精密量取10 μL注入液相色谱仪；另取经105 ℃干燥至恒重的盐酸格拉司琼对照品用水制成每1 mL含盐酸格拉司琼10 μg的溶液，作为对照品溶液，同法测定，按外标法计算，结果见表1。

4　讨论
　　本文先后采用了5种不同组分、比例的流动相，经实验，采用甲醇-0.05 mol.L-1醋酸钠缓冲液-三乙胺(70∶30∶0.25，用冰醋酸调pH至7)为本品含量测定的流动相，所得峰形较好，分离度令人满意。具有专属性强、无干扰、分析快速准确的特点，且操作简便。■

夏保云（中国科学技术大学应用化学系博士）
吴强（合肥医工医药研究所　合肥　230031）
何广卫（合肥医工医药研究所　合肥　230031）

参考文献