高效液相色谱法测定大黄降脂粉中大黄酸、大黄素、丹参酮ⅡA的含量

高效液相色谱法测定大黄降脂粉中大黄酸、
大黄素、丹参酮ⅡA的含量

封士兰　陈立仁　赵富虎　王顼瑞　赵文君

摘要　目的：测定大黄降脂粉中大黄酸、大黄素、丹参酮ⅡA的含 量。方法：高效液相色谱法，Kromasal ODS柱。甲醇-0.1%磷酸(265∶35) 为流动相，检测波长：254 nm，柱温：45　℃。结果：可同时测定大黄酸 、大黄素、丹参酮ⅡA的含量。其浓度分别在1.22～5.55，2.25～10.73，0.33～1. 23 μg.mL-1范围内与峰面积呈线性关系，平均回收率(n=3)分别为104.2%( RSD＝2.5%)，96.5%(RSD=2.0%)，95.2%(RSD=2.8%)。结论：方法简便、快速准确，可作为样品的检测方法。
关键词　高效液相色谱法　大黄酸　大黄素　丹参酮ⅡA　大黄降脂 粉
　　大黄降脂粉为自拟方，全方由大黄、山楂、草决明子、何首乌、茵陈、丹参、枸杞子组 成。具有补肾活血，清热利湿，消导解毒的功效，现代药理研究证实前5味药均有降脂作用 ［1］。丹参、枸杞子有清除自由基，防止脂质过氧化的作用［1］。为了控 制产品质量，我们对其中大黄酸、大黄素、丹参酮ⅡA进行了含量测定。

1　仪器与试药

　　高效液相色谱仪，美国Waters公司，515泵，2487紫外检测器，Millennium32色谱管 理站，Kromasal ODS　5 μm柱(250 mm×4.6 mm,中国科学院兰州化物所生产)。水为双蒸 水 ，甲醇为分析纯，所用其他试剂均为分析纯。对照品购自中国药品生物制品检定所。样品由 兰州太宝制药厂试生产，每桶25 kg。

2　色谱条件

　　流动相：甲醇-0.1%磷酸(265∶35)，流速：1.1 mL.min-1，柱温：45 ℃，检测波 长：254 nm，进样量：10 μL。

3　实验方法

3.1　色谱行为　取5.64 μg.mL-1大黄酸、8.28 μg .mL-1大黄素、1.23 μg.mL-1丹参酮ⅡA对照品甲醇溶液各1 mL混合，进 样，其保留时间分别为：8.09，13.06，14.75 min，3个成分峰分离良好，色谱图见图1- A。取大黄降脂粉样品溶液进样，样品中大黄酸、大黄素、丹参酮ⅡA分离良好，并且无杂 质峰干扰，色谱图见图1-B。取山楂、枸杞子、茵陈阴性对照液进样，其在5.0 min以后无 干扰峰，色谱图见图1-C。
 



图1　色谱图
A.对照品　B.样品　C.阴性对照品
1.大黄酸　2.大黄素　3.丹参酮ⅡA

3.2　线性关系的考察　分别精密称取大黄酸5.64 mg、大黄素 4.14 mg、丹参酮ⅡA 2.46 mg置10 mL容量瓶中，加甲醇超声溶解，定容，用0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液分别稀释成系列浓度的对照品溶液，进样10 μL，每个浓度重复测 定3次，以峰面积A为横坐标，浓度C为纵坐标，进行回归处理，大黄酸、大黄素、 丹参酮ⅡA的回归方程分别为
C=-0.657+2.8×10-5A　r=0.999 9
C=-0.013 5+1.58×10-5A　r=0.998 7
C=0.120+6.84×10-7A　r=0.998 9
线性范围分别为1.22～5.55，2.25～10.73，0.33～1.23 μg. mL-1。
3.3　精密度试验　分别精密取5.64 μg.mL-1大黄酸 、8.28 μg.mL-1大黄素、1.23 μg.mL-1丹参酮ⅡA对照品甲醇溶液， 重复进样4次，测定峰面积，RSD分别为0.39%，0.33%，0.30%。
3.4　稳定性试验　取同一样品溶液在0，3，6 h分别进样，记 录峰面积，大黄酸RSD=3.3%，大黄素RSD=2.3%，丹参酮ⅡA RSD=2.3%( n=3)。
3.5　重复性试验　精密取2号样品0.250 0 g，5份，按“3.8 ”项操作，分别测定大黄酸、大黄素、丹参酮ⅡA的含量，大黄酸RSD=0.9%，大黄素 RSD=1.2%，丹参酮ⅡA RSD=1.1%。
3.6　提取溶剂比较　精密取2号样品，分别用水和甲醇为提取 溶剂，按“3.8”项制备样品溶液。分别取水提样品溶液和甲醇提样品溶液10 μL进样，结 果以水为溶剂的样品只能检出微量大黄酸和大黄素，丹参酮ⅡA检不出，因此样品测定选 择甲醇为提取溶剂。
3.7　加样回收率试验　精密取2号样品0.2500 g，分别精密加 入5.64 μg.mL-1大黄酸、8.28 μg.mL-1大黄素对照品甲醇溶液各2.50 mL及1.23 μg.mL-1丹参酮ⅡA对照品甲醇溶液1.5 mL，按“3.8”项操作 ，测 定大黄酸、大黄素、丹参酮ⅡA的含量，计算回收率，结果平均回收率分别为104.2%( RSD=2.5%)，96.5%(RSD=2.0%)，95.2%(RSD=2.8%)，n=3。
3.8　样品测定　精密称取大黄降脂粉0.250 0 g，加适量甲醇 ，超声溶解1 h，过滤，药渣再加甲醇适量，超声溶解，过滤，重复至滤液几乎无色，合并 滤液，定容至25 mL，用0.45 μm膜过滤，续滤液为样品溶液。分别精密取5.64 μg.mL -1大黄酸、8.28 μg.mL-1大黄素、1.23 μg.mL-1丹参酮ⅡA对 照品溶液和样品溶液各10 μL，按上述色谱条件进样测定，以外标两点法计算样品中大黄酸 、大黄素、丹参酮ⅡA的含量，测得2批样品含量的结果，见表1。

表1　样品中大黄酸、大黄素、丹参酮ⅡA的含量
(μg.g-1，n=3)
 

成分 样品1 样品2 
大黄酸 0.13(3.2%) 0.16(2.6%) 
大黄素 0.047(3.6%) 0.048(2.9%) 
丹参酮ⅡA 0.0013(3.5%) 0.0012(3.8%) 

注：括号内为RSD(%)值 
4　讨论

4.1　用本文的流动相，在常温下，大黄素与丹参酮ⅡA的峰 完全重叠。因此分别做了25 ℃，30　℃，35　℃，40　℃，45 ℃柱温下大黄素和丹参酮Ⅱ A的分离色谱图 ，结果随着柱温的升高，保留时间逐渐变小，两者的分离度逐渐变大，到45 ℃时分离度达1 .13，分离较好，而且不影响色谱分离的稳定性。
4.2　大黄降脂粉处方中大黄、草决明子和何首乌中都含有大黄 酸和大黄素，所以我们选择大黄酸和大黄素做含量测定，同时又测定丹参中丹参酮ⅡA的 含量，这样可以比较全面地控制大黄降脂粉的质量。

封士兰（兰州医学院药学系）
陈立仁（中科院兰州化物所　730000）
赵富虎（兰州太宝制药厂　730050）
王顼瑞（兰州太宝制药厂　730050）
赵文君（兰州太宝制药厂　730050）

参考文献
1，郑占虎，董泽宏，佘靖主编.中药现代研究与应用.北京：学苑出版社，1998.1卷：415， 612；2卷：2000，1149；3卷：2319；4卷：3101，3202

(本文于1999年8月2日收到)