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目的：建立测定复方荔枝草颗粒剂中高车前苷含量的高效液 相色谱法。方法：以KF-C18(250 mm×4.6 mm,10 μm)为分析柱，流动相为甲醇- 水-pH 3.5的1.0 mol.L-1磷酸盐缓冲液(40∶55∶5）；柱温为45℃；检测波长 为335 nm；流速为1.0 mL.min-1，采用面积外标法。 结果：线性范围3.12×10-3～0.20 μg，平均回收率为96.96%～ 101.5%，RSD＜0.69%(n=3)。 结论：本法简便、灵敏、重现性好，可用于测定该颗粒剂高车前苷的含量和质 量标准的控制。
关键词 高车前苷 复方荔枝草颗粒剂 高效液相色谱
复方荔枝草颗粒剂主要由荔枝草(Salvia plebeia R.Br.)、车前草( Plantago asiatica L.)和六月雪［Serissa serissoides(DC.)Druce］等多味中 药组成，具有清热解毒、利尿通淋之功效。方中主药荔枝草和车前草具有利尿、清热和消肿 等作用［1，2］，且都含有黄酮苷类化合物高车前苷［3，4］。为了控制制剂质量， 对高车前苷进行定量分析，本文采用反相高效液相色谱法测定，该法准确、灵敏、稳定性好 。
1 仪器与试药
岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，C-R7A数据处理机。
高车前苷对照品(含量98%以上，上海医药工业研究院提供)；复方荔枝草颗粒剂(南京大学医 学院附属鼓楼医院生产)；甲醇为色谱纯，磷酸、磷酸二氢钾等均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：KF-C18(4.6 mm×2 50 mm,10 μm)；紫外检测波长：335 nm；流动相：甲醇-水-pH 3.5的1.0 mol.L-1磷酸盐缓冲液(磷酸二氢钾68.05 g，加水适量，溶解，再加入磷酸1.6 m L，然后用水稀释至500 mL)(40∶55∶5）；柱温：45 ℃；流量：1.0 mL.min -1；纸速：2 mm.min-1。
2.2 高车前苷标准曲线 精密称取高车前苷对照品适量，加入甲醇溶解 后，稀释成0.2 mg.mL-1的溶液，再用流动相将此溶液稀释，配制浓度为10.00，5 .00，2.50，1.25，0.625，0.312，0.156 μg.mL-1的对照品溶液，精密量取 20 μL进样，按上述条件测定。用色谱峰面积(Y）对高车前苷浓度(X)作图，得到 工作曲线，其回归方程：
Y=33 082.50X-1 026.33 r=1.000 0
在0.156～10.00 μg.mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.3 样品测定 取复方荔枝草颗粒剂研碎，精密称取约1.0 g，置于磨 口锥形瓶中，精密加入60%乙醇10 mL，称重，置超声振荡器中超声1.5 h，冷却后，再称 重，补加60%乙醇至原重，过滤，弃去初滤液，收集续滤液，精密量取滤液1.0 mL置于25 m L量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，进样分析。按外标法，以峰面积计算高车前苷含量 ，结果3批样品含量分别为0.451，0.512，0.711 mg.g-1,RSD分别为0.84% ，0.81%，0.75%(n=3)。色谱图见图1。
图1 高效液相色谱图
A.高车前苷对照品 B.复方荔枝草颗粒剂提取液
C.复方荔枝草颗粒剂提取液+高车前苷对照品
1.高车前苷(16.6 min)
2.4 回收率试验 取已知高车前苷含量的复方荔枝草颗粒剂研碎，精密 称 取约1.0 g，共3份，于每份中分别加入0.5，1.0，3.0 mL浓度为221.2 μg.mL-1 的高车前苷对照品溶液(溶媒为60%乙醇)，再分别补加60%乙醇9.5，9.0，7 mL，按样品 测定项下操作，制成3种不同浓度的供试液，每一浓度重复3次，计算高车前苷含量和回收率 ，结果回收率为96.96%～101.5%，RSD＜0.69%。
2.5 精密度试验 以高、中、低3种不同浓度的高车前苷对照品溶液， 按标准曲线测定项下操作，考察1 d内和1周日间峰面积变异性(n=5)，结果日内RSD ＜3.3%，日间RSD＜4.7%。
2.6 重复性考察 取复方荔枝草颗粒剂研碎，精密称取约1.0 g，按样 品测定项下操作，制取供试液5份，进样测定，每一份重复3次，计算复方荔枝草颗粒剂中高 车前苷含量，结果平均含量为0.507 mg.g-1，RSD为2.3%(n=15)。
2.7 不同提取法对高车前苷提取率的影响 取复方荔枝草颗粒剂研碎， 称取适量，共3份，以60%乙醇为溶媒，分别采用索氏法、超声法和回流提取法，提取1.5 h ，然后测定， 并计算复方荔枝草颗粒剂中高车前苷含量，结果表明采用超声法提取效果最 佳。
2.8 不同溶媒对高车前苷提取率的影响 取复方荔枝草颗粒剂研碎，精 密称取约1.0 g，共7份，分别以甲醇、水及50%，60%，65%，70%，95%乙醇为溶媒超声提取 ，然后按样品测定项下操作，制取供试液，进样测定，计算复方荔枝草颗粒剂中高车前苷含 量，结果表明以60%乙醇为溶媒超声提取效果最佳。
3 讨论
3.1 本文采用超声法对高车前苷提出率最佳，并简化了 提取操作过程。超声波振动的空化、机械粉碎、搅拌等作用，有利于化学溶媒渗入被提物质 内部，加速有效成分进入溶媒中，促进有效成分的提取，从而提高了有效成分的提出率。
3.2 用不含荔枝草和车前草提取物制成的空白样品，按本法进行测定， 在高车前苷色谱图相应的位置上无峰，对高效液相色谱测定结果没有干扰。
吴正红（南京大学医学院附属鼓楼医院临床药理室 210008）
裴云萍（南京大学医学院附属鼓楼医院临床药理室 210008）
方芸（南京大学医学院附属鼓楼医院临床药理室 210008）
陈志一（南京大学医学院附属鼓楼医院临床药理室 210008）
参考文献
1，中国医学科学院药用植物资源开发研究所，中国医学科学院药物研究 所等编.中药志.第二版(第四册).北京：人民卫生出版社，1988.542
2，中国药典.1995.一部：53
3，蒋毅，罗思齐，郑民实.荔枝草活性成分的研究.医药工业，1987，18(8)：3 49
4，肖崇厚主编.中药化学.第一版.上海：上海科学技术出版社，1988.194