HPLC法测定风湿液中蛇床子素的含量

李立　丁刚　吴菊蕙　钱广生　刘三康
李立　丁刚　吴菊蕙（阜阳制药厂，安徽 阜阳 236018）　；钱广生　刘三康（华西医科大学，四川 成都 610041）

关键词: 蛇床子素；高效液相色谱法；风湿液


　　摘要　目的：用高效液相色谱法测定风湿液中蛇床子素的含量。方法：固定相为ODS柱，流动相为甲醇-0.1 mol.L-1硫酸铵水溶液(65∶37),用硫酸溶液(1→5)调节pH为2.50；检测波长为322 nm。结果：回收率为101.1%，RSD为3.0%。结论：该法能使干扰峰与蛇床子素峰完全分离。
　　中图分类号：R927.2　　文献标识码：A　　
文章编号：1006-0103（2000）03-0203-02

　　风湿液是由独活、鹿角胶、鳖甲胶、红花等中药经提取而成的中药口服液，君药为独活。独活的主要成份为独活内酯、香柠檬内酯、蛇床子素等［1］，对于独活的测定，一般采用气相色谱法或HPLC法测定其中蛇床子素等含量［2,3］。由于风湿液系口服液，处方复杂，文献报道的HPLC法的流动相，在成份分离时有杂质峰与蛇床子素峰形成难分离对。本文建立的高效液相色谱条件，则使干扰峰与蛇床子素峰完全分离，方法简便、准确、重现性较好。

1　实验部分

1.1　仪器与试药　日本岛津LC-6A高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外检测器，C-R4A数据处理机。水为双重蒸馏水；其它试剂皆为分析纯。蛇床子素对照品（中国药品生物制品检定所），风湿液（市售品）。
1.2　色谱条件　色谱柱为Shimpack CLC-ODS（150 mm×6 mm id，5μm）；保护柱为国产YWGC18（10 mm×4.6 mm id，10μm）；流动相为甲醇-0.1 mol．ml-1硫酸铵水溶液(65∶37),用硫酸溶液(1→5)调节pH为2.50；柱温为35℃，检测波长322 nm，理论板数以蛇床子素计算不低于9000。
1.3　对照品溶液的制备　取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙醇使溶解并制成每1 ml含0.025 mg蛇床子素的溶液，作为对照品溶液。
1.4　供试品溶液的制备　精取风湿液25.00 ml，置分液漏斗中，加乙醇2 ml，乙醚20 ml，振摇提取，静置，待分层后，分出乙醚层，连续提取三次，合并乙醚提取液，置60℃水浴上挥去乙醚，残留物加乙醇溶解，定容成10.00 ml，离心，上清液作为供试液。
1.5　供试品测定　精取对照品溶液及供试品溶液各10 μl，注入色谱仪，按外标法计算，五批结果分别为：0.996% 、1.142% 、1.024% 、0.902% 、0.856%。

2　方法评价

2.1　对照品线性的考察　精取蛇床子素对照品适量，用乙醇溶解并稀释，分别配制成0.0096、0.0192、0.0288、0.0384、0.0480 mg．ml-1，精取上述溶液各10 μl，注入色谱仪，每种浓度溶液进样三次，取其峰面积平均值（Y）与其进样量（μg）进行直线回归，回归方程为Y=-8540+1.27136×106X，r=0.9998，当进样量在0.096～0.48 μg范围时线性关系良好。
2.2　精密度试验　同一供试品于同一日反复测定5次，其峰面积的RSD为0.54%。同一供试品在5个不同日期分别测定3次，其平均含量的RSD为1.89%。
2.3　回收率试验　精取已知量的供试品，准确加入蛇床子素对照品适量，按“1.4”项下的方法操作，测定其含量，求出加样回收率(表1)。

表1　蛇床子素加样回收率测定结果
Table 1　The recovery test of osthol 

蛇床子素量
Amounts of Osthol 
No. Sample
/mg Added
/mg Detected
/mg Recovery
/% Average
Recovery/% 
1 0.1003 0.240 0.3610 108.62 
2 0.1003 0.240 0.3420 100.07 
3 0.1003 0.240 0.3434 101.29 
4 0.1505 0.096 0.2478 101.35 101.10 
5 0.1505 0.096 0.2463 99.79 RSD=3.0% 
6 0.1505 0.096 0.2450 98.44 
7 0.1003 0.096 0.1995 103.33 
8 0.1003 0.096 0.1950 98.65 
9 0.1003 0.096 0.1947 98.34 

2.4　空白试验　依处方配比(缺独活)及风湿液制剂工艺制得空白样品，同上操作，结果在空白样品色谱图中蛇床子素峰相应的保留时间处无干扰（图1）。供试品色谱图中蛇床子素峰与其它成份达基线分离。



图1　蛇床子素（a）、空白样品（b）、独活（c）、风湿液（d）的色谱图
Fig 1 The chromatograms of osthol (a), blank sample 
(b),Radix Angelicae Pubescentis (c) and Fengshi oral liquid (d)

　　为保证样品中蛇床子素被提取充分，对同一批供试品进行多种方法提取，确定在加入少量乙醇的情况下，用乙醚提取三次，提取液低温挥干乙醚，残留物用乙醇溶解，直接注入色谱仪测定。

3　讨论

3.1　用紫外分光光度计对本实验条件下蛇床子素对照品溶液作波长扫描，发现其最大吸收波长为322 nm，故选用322 nm作为检测波长。
3.2　依照文献［3］的流动相试验，所得色谱图中有一干扰成份色谱峰位于蛇床子素峰后侧，与蛇床子素峰形成一个难分离对，为此试验了不同办法，结果使用流动相甲醇-0.1mol．L-1硫酸铵(65∶37)，硫酸（1→5）调pH为2.5，可使这一难分离组分与蛇床子素峰完全分离，峰形窄且对称。研究中曾对市售样品依照本法测定，色谱图见图1，说明本方法对风湿液中蛇床子素的测定有实际应用价值。

作者简介：李立（男），安徽阜阳，学士，工程师，从事中西药物的质量标准研究。

参考文献

1，阴健，郭力弓.中药现代研究与临床应用 I ［M］. 北京：学苑出版社，506
2，高海，孙文基，沙振方. 独活中两种香豆素含量的气相色谱法测定［J］. 药物分析杂志，1992，19（4）∶221 
3，程大敦，赵俊. 蛇床子中香豆素类的含量测定［J］. 药物分析杂志，1987，7（2）∶112