利福平滴眼液的高效液相色谱法鉴别

                       利福平滴眼液的高效液相色谱法鉴别
             作者：王梅娟 来源：江苏药学与临床研究2005年第13卷第1期 
摘要：目的建立高效液相色谱法鉴别利福平滴眼液。方法采用Spherisorb CN色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-乙腈-0.075 mol/L磷酸二氢钾溶液(80：80：65)；流量1ml/min ；检测波长254nm；进样体积为20μl。结果具有良好的重复性。结论本法专属性强。
关键词：利福平滴眼液；高效液相色谱法；保留时间
    利福平滴眼液是一种广谱抗生素眼科用药，临床广泛应用。现标准的鉴别方法为紫外分光光度法。在对药丸作鉴别试验时一般能符合标准，但有的药丸因辅料干扰在236nm的波长处常测不出最大吸收，鉴别得不出合理结论。现建立用利福平对照品HPLC法来鉴别利福平滴眼液，具有排除干扰、准确的特点。
    1 仪器与试药
    岛津LC-1OAT vP型高效液相色谱泵；SPD-1OAvP型紫外检测器；HW-200色谱工作站；UV-2501PC紫外分光光度计；BP211D电子天平；微孔滤膜(上海半岛实业)；纯水。
    利福平对照品(批号：130496—2000，中国药品生物制品检定所)；利福平滴眼液(供试品，规格10ml／支，批号：030110、030402、031109，芜湖某制药有限公司)；甲醇、乙腈均为色谱纯(Fisher，江苏汉邦科技有限公司)；磷酸二氢钾为分析纯(南京化学试剂厂)。
    2 方法与结果
    2.1 利福平的紫外分光图谱的对照与测试取样品1粒(批号030110)，用pH7.8的磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水溶解使成1000ml，即得)，制成每毫升中约含lOμg的溶液，同时取利福平对照液(1Oμg/ml。)照分光光度法测定在236、255、334nm及474nm的波长处有最大吸收。利福平标准品紫外图谱在这4个波长处有最大吸收。而有的利福平滴眼液的滴丸中厂家添加了赋形剂，将其压制成片状(批号031109)，由于赋形剂的加入，使得紫外测定其最大吸收时在236nm的波长处产生干扰，难以对其鉴别作出判断。
    2．2 高效液相色谱法鉴别试验
    2．2．1 色谱条件选择 色谱柱为Spherisorb CN柱(4.6mm×250mm，5μm，大连依利特)；流动相为甲醇-乙腈-0.075mol/L磷酸二氢钾溶液(80：80：65)；检测波长为254nm；流量1ml/min；进样体积20μL。
    2．2．2 利福平的HPLC鉴别法 取样品(批号031109)1片，加12.5ml甲醇溶解，吸取5ml，加流动相至50ml，制得0.08mg/ml的溶液，测得液相色谱图；同样称取利福平对照品适量，加甲醇溶解(每2mg利福平加甲醇1m1)，再加流动相制得0.08mg/ml的溶液，按HPLC法进行测定，检测波长为254nm；二者保留时间一致，操作时应避光。
    2．2．3 重复性试验 取同批(批号：030110)利福平滴眼液按“2．2．2”方法操作，制成分别为：0.04、0.08、0.16、0.32mg/ml的浓度，进样，保留时间均相同，结果具良好的重复性。
    2．2．4 供试液稳定性试验 取利福平滴眼液3批(批号：030110、030402、031109)，按“2．2．2”方法操作，在避光的条件下放置2、4、6、8、24h均未出现明显变化，其理论板数均在4000以上，辅料在此时间内也无干扰峰出现。
    3 讨论
    3．1 利福平滴眼液中的滴丸在其用紫外分光光度法作为鉴别方法时，因各厂家选用辅料的差异，在236nm的波长处测不出最大吸收，使得鉴别试验无法下准确的结论。采用HPLC法以保留时间与对照品一致作为鉴别方法时，因色谱柱分离了辅料，在其检测波长处无干扰。
    3．2 波长的选择。选用236nm波长或254nm波长，均无干扰出现，但考虑到有机溶媒有可能在末端有吸收，254nm的图形较好，故选用254nm作为检测波长。
    3．3 国家标准⋯采用C8柱以分离醌式进行含量测定，本工作仅是鉴别试验，未采用C8柱。
参考文献
1 国家药典委员会编。国家药品监督管理局国家药品标准[S]．Ws-10OOl-(HI)-1027)，第l1册，2002：11-59．
2 国家药典委员会编，中华人民共和国药典[S]． 二部，北京：化学工业出版社，2OOO：附录．IV A，附录．VD．