高效液相色谱法测定喘咳宁片中盐酸麻黄碱的含量

【摘要】  目的 建立喘咳宁片中盐酸麻黄碱含量的测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法，用汉邦C18（4.6×250 mm,5 μm）色谱柱，以乙腈－0.1％磷酸（5：95）为流动相，流速0.8 ml/min，检测波长207 nm，柱温30 ℃。结果 在该条件下，盐酸麻黄碱在0.01174～0.1174 μg范围内，呈良好线性关系（r=1.0000），平均加样回收率为98.3％，RSD为0.7％（n=6）。结论 本方法操作简单，重现性好，可作为该制剂的含量测定方法。

【关键词】  反相高效液相色谱 喘咳宁片 盐酸麻黄碱

     喘咳宁片是由桔梗、猪胆汁、甘草、苦杏仁霜、麻黄5味中药材组成的复方制剂，原质量标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第四册》［1］。本方中麻黄为主药，具有发汗散寒、宣肺平喘、利水消肿的功能。用于风寒感冒、胸闷喘咳、风水浮肿、支气管哮喘等病症。麻黄中的主要有效成分为盐酸麻黄碱，原标准中没有含量测定的方法，无法有效控制其内在质量，为了更有效地控制该制剂的内在质量，本实验选用反相高效液相色谱法［2］测定麻黄中盐酸麻黄碱的含量，操作方法简便，重现性好，具有合理性、可应用性，可以作为控制喘咳宁片的内在质量的定量指标。

    1  资料与方法

    1.1  仪器与试药  日本岛津LC－2010AHT高效液相色谱仪，紫外检测器；KQ-100型超声波清洗器；岛津UV-2450紫外分光光度计；盐酸麻黄碱对照品（批号171242-200404，购自中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯试剂，水为纯化水，其他试剂均为分析纯；喘咳宁片（吉林省某药业生产）。

    1.2  方法

    1.2.1  对照品溶液的制备  精密称取盐酸麻黄碱对照品适量，加甲醇制成每1 ml含11.74 μg的溶液。

    1.2.2  供试品溶液的制备  取本品（批号20051103）10片，去糖衣，测定平均片重，研细，取1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，超声处理40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液1 ml，置中性氧化铝柱（100～200目，1.5 g，内径1 cm）上，用50％甲醇洗脱，收集洗脱液约9 ml，置10 ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。

    1.2.3  色谱条件

    1.2.3.1  测定波长的选择  取对照品溶液，依法用岛津UV-2450紫外分光光度计在200～400 nm范围内进行扫描，结果盐酸麻黄碱在207 nm波长处有最大吸收，故选择207 nm为本实验的测定波长。

    1.2.3.2  系统适用性试验  分别采用色谱柱：（1）汉邦C18（4.6×250 mm,5 μm）；（2）kromasil C18（4.6×250 mm,5 μm），以乙腈-0.1%磷酸（5∶95）为流动相，检测波长为207 nm，柱温30 ℃。精密吸取对照品溶液5 μl，供试品溶液10 μl，分别注入液相色谱内，测得对照品与供试品的盐酸麻黄碱色谱峰的理论板数分别为：（1）15711，15366；（2）11064，11118。由此确定合理的理论板数，理论板数按盐酸麻黄碱色谱峰计算应不低于4000。
 1.2.4  方法学考察

    1.2.4.1  标准曲线制备  精密吸取对照品溶液1、4、6、8、10 μl，分别注入液相色谱仪，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为Y=1641856X-205.245 （r=1.0000），结果表明盐酸麻黄碱在0.01174～0.1174 μg范围内，呈良好线性关系。

    1.2.4.2  阴性对照试验  按供试品溶液制备方法，制成不含麻黄药材的阴性对照溶液。吸取该溶液10 μl注入液相色谱内，依法测定，结果在与盐酸麻黄碱色谱峰相应的保留时间附近无干扰峰出现，从而证明本方法的合理与可行性。

    1.2.4.3  稳定性试验  取同一供试品溶液，在0、5、10、15、20 h,分别进样10 μl，按盐酸麻黄碱色谱峰面积计，峰面积平均值为125535，RSD为0.9%。结果表明20 h内供试品中的盐酸麻黄碱的含量稳定。

    1.2.4.4  精密度试验  取同一供试品溶液10 μl，重复进样6次，盐酸麻黄碱色谱峰面积的平均值为125490，RSD为0.8%。测定结果表明该方法的精密度良好。

    1.2.4.5  重现性试验  取同一供试品，按供试品溶液的制备方法，平行制备6份，对照品溶液进样5 μl，供试品溶液进样10 μl，依法测得样品中盐酸麻黄碱含量的平均值为1.12 mg/g，RSD为1.0%，表明本方法具有良好的重现性。

    1.2.4.6  回收率试验  精密称取经同法测定，已知含量的供试品0.5 g（批号20051103，含量为1.114 mg/g）6份，分别精密加入新配制的盐酸麻黄碱对照品溶液（24.96 μg/ml）25 ml，按供试品溶液的制备方法制备，对照品溶液进样5 μl，供试品溶液进样10 μl，依法测定，计算回收率，盐酸麻黄碱的平均回收率为98.3％，RSD为0.7％。表明本方法准确可行。

    1.2.4.7  样品测定结果  取5批喘咳宁片样品，分别按供试品溶液的制备方法制备，对照品溶液进样5 μl，供试品溶液进样10 μl，每批测定2次，盐酸麻黄碱的平均含量见表1。表1  样品测定结果

    2  讨论

    本实验对供试品溶液的制备方法进行了考察。曾用两种方法，一种是本文所述的上中性氧化铝柱的方法，另一种是加甲醇超声处理，滤过后直接上样的方法。两种方法所测得的结果基本一致，但经比较可知，未经中性氧化铝柱处理的供试品，色谱图中显示，杂质明显偏多，并有杂质峰干扰，易损伤色谱柱，因此选用上中性氧化铝柱的方法。

【参考文献】
  1 卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂，第13册.北京：人民卫生出版社，1989，195.

  2 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）附录.北京：化学工业出版社，1995，38-40.