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摘要： 目的 建立离子对分配色谱法测定复方磺胺甲口恶唑片中磺胺甲口恶唑和甲氧苄啶的含量。方法 流动相为甲醇∶034%磷酸二氢钾∶005mol/L四丁基溴化铵(55∶45∶5)，ODS C18柱为色谱柱，柱温25℃，流速10ml/min，检测波长240nm。结果 磺胺甲口恶唑在40～200μg/ml(r=09999)、甲氧苄啶在8～40μg/ml(r=09998)的浓度范围内呈线性关系，平均回收率分别为1003%、1006%；RSD分别为029%、032%。结论 该法专属性强，操作简便，结果准确。
关键词： 离子对分配色谱法； 磺胺甲口恶唑； 甲氧苄啶； 含量测定
复方磺胺甲口恶唑片是磺胺甲口恶唑与甲氧苄啶的复方制剂，甲氧苄啶与磺胺药合用可使细菌的叶酸合成代谢遭到双重阻断，有协同作用，增强磺胺药抗菌活性，使抑菌作用转为杀菌作用，减少耐药菌株产生，临床主要用于敏感菌所致的小儿急性中耳炎、成人慢性支气管炎、尿道感染、肠道感染等。本文采用离子对分配色谱法测定复方磺胺甲口恶唑片主要成分磺胺甲口恶唑、甲氧苄啶的含量，方法准确、简便、可靠。
1 仪器与试药
1.1 仪器LC10AT高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD10A可见紫外检测器(日本岛津)，N2000数据工作站(浙江大学智能信息研究所)，92SM202ADRSCS分析天平(瑞士Precisa)，UV265分光光度计(日本岛津)。
1.2 试药磺胺甲口恶唑(中国药品生物制品检定所，批号00259503)，甲氧苄啶(中国药品生物制品检定所，批号10031200304)，甲醇(色谱纯)，磷酸二氢钾(分析纯)，四丁基溴化铵(分析纯)，复方磺胺甲口恶唑片(市售)。
2 方法和结果
2.1 色谱条件及系统用性试验色谱柱：Shimadzu ShimPack C18柱(46mm×150mm， 5μm)；流动相为甲醇∶034%磷酸二氢钾∶005mol/L四丁基溴化铵(55∶45∶5)；柱温25℃；流速10ml/min，检测波长240nm，进样量20μl。理论板数按磺胺甲口恶唑峰计算不低于3000，按峰面积外标法计算。
2.2 检测波长确定文献［1］选用240nm或254nm［2，3］为检测波长。经试验比较，因处方中甲氧苄啶的量很少，在240nm处甲氧苄啶峰面积更大，检测灵敏度更高，故选用240nm为检测波长。
2.3 线性关系精密称取磺胺甲口恶唑对照品40mg，甲氧苄啶对照品8mg，置50ml容量瓶中，加甲醇适量使溶，用流动相稀释至刻度，摇匀，作储备液。精密量取该储备液10、15、20、25、30、35、40和50ml置20ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。照高效液相色谱法，进样20μl，记录色谱图，以峰面积(A)对浓度(C)作图进行统计学处理，回归方程分别为：磺胺甲口恶唑 A=1.412+1.905×104C r=0.9999甲氧苄啶 A=0.4802+6.012×104C r=0.9998 表明磺胺甲口恶唑浓度在40～200μg/ml， 甲氧苄啶浓度在8～40μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。
2.4 精密度试验和稳定性试验取线性关系下含磺胺甲口恶唑80μg/ml，甲氧苄啶16μg/ml的溶液，重复进样6次，磺胺甲口恶唑峰面积的RSD为022%，甲氧苄啶峰面积的RSD为024%。另取上述溶液，分别放置0、1、2、3、4、5、6、7和8h进行测定，磺胺甲口恶唑峰面积的RSD为032%，甲氧苄啶峰面积的RSD为046%。结果显示本方法重现性良好，溶液稳定。
2.5 空白实验按处方配制除磺胺甲口恶唑、甲氧苄啶的空白样品，照样品含量测定项下方法测定。结果显示辅料对样品含量测定结果无影响。
2.6 回收率试验按处方比例，精密称取磺胺甲口恶唑，甲氧苄啶对照品适量，同时加入处方比例的辅料，配制5批。照样品含量项下方法测定，每批进样3次。结果磺胺甲口恶唑平均回收率为1003%，RSD为029%，甲氧苄啶平均回收率为1006%，RSD为032%。
2.7 样品测定取复方磺胺甲口恶唑20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于磺胺甲口恶唑04g)，置50ml容量瓶中，加甲醇适量振摇使溶，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液2ml置100ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，按上述色谱条件取续滤液20μl注入色谱仪，记录色谱图。同时精密称定磺胺甲口恶唑对照品40mg和甲氧苄啶对照品16mg置50ml容量瓶中，加甲醇适量使溶，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，同法操作，以峰面积外表法分别计算磺胺甲口恶唑、甲氧苄啶的含量。
2.8 结果比较采用本文方法和中国药典2005年版方法对6批不同厂家的复方磺胺甲口恶唑样本进行测定，结果见表1。表1显示两种方法测定磺胺甲口恶唑无显著性差异。
3 讨论
(1)本文采用文献HPLC法测定复方磺胺甲口恶唑 表1 6批不同厂家样品用本法和中国药典 含量，结果两组分保留时间过长，且易产生溶剂峰干扰，峰对称性差，拖尾因子过大。(2)离子对分配色谱是离子对提取与色谱技术结合的产物，具有广泛的选择性，能够有效提高被测成分的检出灵敏度，是近年来发展较快的一种HPLC的洗脱方法。本文采用该法得到很好分析效果。(3)比较阳离子型离子对试剂四丁基溴化铵和十六烷基三甲基溴化铵，使用后者虽能较好分离，但由于烷基碳链较长，平衡时间太长，不适于快速分析，故选用四丁基溴化铵。(4)曾用不同品牌的色谱柱和同一品牌使用不同阶段的色谱柱对典型样品进行日间重复性试验，结果表明本法重现性良好。(5)本法能在同一条件下同时检出磺胺甲口恶唑、甲氧苄啶的含量，且不需要调整流动相的pH值，操作简单，灵敏度高，结果准确，适用于该复方制剂的质量控制。
参考文献
［1］ 国家药典委员会. 中华人民共和国药典. 二部［S］. 北京：化学工业出版社，2005：439
［2］ 高秀蕊，王秀萍. HPLC测定复方头孢氨苄中的头孢氨苄和甲氧苄啶含量方法的改进［J］. 中国抗生素杂志，2004，29(11)：694
［3］ 皮立. 用反相高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊中头孢氨苄和甲氧苄啶的含量［J］. 沈阳药科大学学报，2000，17(2)：119