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毛细管电泳法测定马齿苋中有效成分的含量

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摘要:【摘要】就毛细管电泳法分析马齿苋中的二羟基苯丙氨酸的含量做一探讨,并讨论磷酸盐缓冲液浓度及SDS浓度对分离的影响。【关键词】毛细管电泳法。缓冲液浓度MeasuringtheContentoftheEffectiveElementsonPurlanewithCapillaryElectrophoreticMethodZhangWen-dian,YAOGang-qian【Abstract】Ananalysison......

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    【摘要】就毛细管电泳法分析马齿苋中的二羟基苯丙氨酸的含量做一探讨,并讨论磷酸盐缓冲液浓度及SDS浓度对分离的影响。
    【关键词】毛细管电泳法;二羟基苯丙氨酸;缓冲液浓度
    Measuring the Content of the Effective Elements on Purlane with Capillary Electrophoretic Method
Zhang Wen-dian,YAO Gang-qian
    【Abstract】An analysis on the content of the effective elements in purslane by capillary electrophonetic method is made,and a discussion is made on the density of phosphate amortizing fluid and also the effect of SDS density to the separation.
    【Key words】capillary electrophonetic method;dihydric-denzyl-trotyl amino acid;density of phosphate amortizing fluid
    马齿苋(Portulaca oleracea L.)基原为马齿苋科植物马齿苋的全草,异名马齿草、五行草、马齿菜。民间用其治疗细菌性痢疾、急性肠胃炎,也有预防心脏病及抗衰老的功效,其中二羟基苯氨酸为有效成分之一。目前马齿苋的分析方法主要为气相色谱一质谱联用法、气相色谱法、液相色谱法,这些方法在应用上都有局限性。毛细管电泳是近年来发展起来的一种重要分离分析技术,本实验采用胶束毛细管电泳法,测定马齿苋中的二羟基苯丙氨酸的含量,实验结果良好。
    一、实验部分
    1.仪器与试剂
    毛细管电泳仪;计算机Compaq Prolinea 4/50型;Phs-3C型精密pH计;熔硅毛细管(58.2cm×7μmi.d.,有效长度50.6cm);化学对照品二羟基苯丙氨酸由中国药品生物制品鉴定所提供;马齿苋为自己采集的新鲜样品;分析纯磷酸盐;表面活性剂SDS;水为双蒸水,其他试剂均为分析纯。
    2.实验方法
    进样前,毛细管首先在室温下,依次用O.5mol/L,0.1mol/L的NaOH及双蒸水各冲洗5分钟,再用背景缓冲液清洗1O分钟,最后施加20kV电压预平衡1O分钟,每进样5次后需清洗毛细管,步骤同上。样品采用重力自动进样,进样时间5秒,214nm紫外检测,进毛细管柱的所有试液均用超滤膜过滤。
    二、结果与讨论
    在优化实验条件下,利用马齿苋的鲜品,索氏提取3小时,反复提取3次,合并提取液,浓缩。利用毛细管电泳法测定马齿苋中的有效成分含量,得电泳图谱,重复,在相同条件下得电泳图谱,经比较,重现性良好。
    1.磷酸盐缓冲液浓度对分离的影响
    用配置好的磷酸盐系列浓度1O,20,3O,40,50mmol/L作为缓冲液进行分离马齿苋样品可知,当浓度较小时,谱峰较宽,迁移时间短;当浓度较大时,迁移时间延长。实验结果表明,选磷酸盐浓度为30mmol/L,可以获得短的迁移时间和较好的分离效果。
    2.SDS浓度对分离的影响
    单独使用30mmol/L磷酸盐缓冲液,马齿苋中二羟基苯丙氨酸能从其他成分中分离出来,但未知组分有重叠,因此我们选用胶束毛细管电泳法。实验时,固定磷酸盐的浓度为5mmol/L,改变SDS浓度为5,1O,15,20,25,30mmol/L,从实验结果看,SDS浓度为5mmol/L时,低于临界胶束浓度8.1mmol/L,谱峰分不开,而SDS浓度太高时,造成基线不稳,噪声也随之增大,迁移时间延长,因此本实验采用含15mmol/LSDS和30mmol/L磷酸盐作为缓冲液(pH9.0)。
    3.标准曲线的绘制
    精密称取适量的二羟基苯丙氨酸对照品,制成不同浓度的标准溶液,在最佳分离条件下进行测定,以二羟基苯丙氨酸的矫正峰面积对浓度作图,结果二羟基苯丙氨酸在0.098~3.46mg/ml范围内显线性关系,线性回归方程为Y=0.027+3.65X,r=0.999。
    4.样品的测定
    精密称取马齿苋2.83g,索氏提取3小时,提取液减压蒸馏至10mL。将制得的样品试液在最佳分离条件下运行,测得样品中二羟基苯丙氨酸的含量(g/g)为0.76%,RSD2.18%(n=3)。
    通过实验认为采用胶束毛细管电泳法,测定马齿苋中的二羟基苯丙氨酸的含量,具有样品处理简单,操作快捷方便的特点,适合于中药分析测定。
[参考文献]
[1]江苏新医学院编.中药大辞典.上册[M].上海科学技术出版社,1998:289
[2]刘鹏岩等.马齿苋挥发油的GC-MS分析[J].河北大学学报,1994,14(3)
[3]Kraybiil,eta1.Int,J.Piant[J].Science,1996,157(1):103-109
[4]Dordrecht,eta1.PiantFoodsHum[J].Nutr.,1994,45(1):1-9

作者: 未知 2008-3-21
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