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摘要：目的：建立一种测定甘草酸注射液中甘草酸台量的高效毛细管电泳法。方法：10mmol/L 磷酸缓冲液(pH7．0)中含12。5mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS)为电泳电解质，电压30kV，擒测波长254nm，毛细管有效长度50cm，管径5Oμ。氨茶碱为内标。结果：甘草酸与氪茶碱的迁移时间分别为4．8和2．8min。甘草酸浓度为62． 5～]000mg/L 时，其浓度与峰面积呈良好线性关系，相关系数(r)为0．9997。目内、日间变异系数均小于5．0%。结论：该方法简单、快速、灵敏，重现性良好，具有较强实用价值
关键词：高效毛细管电泳法；甘草酸；含量测定
Determination nf g|ycyrrhizin。ontent in g|ycyrrhizinaie injection with HPCE
ABCTRACTL OBJECTIVE：To deVelop a method for the determination of glyeyrrhizin content in g]ycyrrhizinate injection 1th high perfoⅢ nce capillarY electrophoresis (HPCE)．
METHOD：Phosphate buffer(10 mmol／L ，Ph=7．O)and SDS(12.5 mmol／L )were used as eleetrolysate Aminophylline was used as interna1 standard at a constant of voltage of 30kV(current of 40～50μA)and detected at a wavelength of 254nm． The effective length of capitlary is 50cm with a dhmeter of 50cm． The developing time was 9 min． RESULTS： The miggation time for glycyrrhlzin and aminophilline was 4．8 and 2．8 min，respectively．A good linearity was shown between the concentration and peak are8 in the concentration range of 62．5～1000mg/L ，r=0 9997．The relative standard deviation for intra d and inter-day was less than 5．0H．CONCLUSION；It seemed that the HPCE method is faster，more convenient，more sensitive and las better reproduction with rauch practical usage．
KEY WORDS HPCE g[ycyrrhizin determination of drug concentration
甘草酸是甘草的主要有效成分之一．具有抗炎、抗过敏、抗溃疡、保肝、解毒等功效．是临床治疗肝病的常用药物.目前，国内有许多药厂生产甘草酸制剂 甘草酸的测定方法有多种，包括紫外分光光度法、比色法、高效液相色谱法、毛细管电泳法及酶联免疫吸附分析法等.《1995年版药典》规定，用重量法测定甘草酸含量。但该方法误差较大，有时所得结果高于实际含量几倍。高效毛细管电泳技术是近lO年迅速发展起来的一种新型分离分析方法，具有快速、简便、高效、应用范围广等优点。本实验建立了一种测定甘草酸注射液中甘草酸含量的醢束电动毛细管电泳法，并使用该方法测定了4批市售甘草酸注射液中甘草酸含量，结果令人满意。
l 实验材料：P／ACE5000型毛细管电泳仪(二极营阵列检测器，IBM 446 DXZ型电脑，GOI D软件)，美国Beckman公司制造；石英毛细管57cm×50μm(有效长度5gem) 美国Beekman公司生产；甘草酸标准品，购于中国药品生物制品检定所，批号为L52—92041氨茶碱，上海信谊药厂生产，批号为98t004 药用甘草酸注射液，江苏天晴制药总厂生产，批号分别为950401，990209，9701302，9907012。磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、十二烷基硫酸钠(SDS)、氢氧化钠、盐酸等试剂均为国产分析纯或优级纯，水为去离子双蒸水。
2 方法与结果
2．1 测定条件lOmmo1/L磷酸缓冲液(pH 7．0)中含12．5mmol/L1SDS作为电泳电解溶液．每次开机后用0．1mol/L 盐酸、水、0．1mo1/L 氢氧化钠、水和电泳电解液各冲洗5min。两改进样之间用电解禳和水各冲洗2min高压进样l0s，恒定电压30kV，运行电流为40～ 5 A，柱温2I℃ ，检测渡长254nm，设定运行时间9min，氨茶碱为内标，含量500mg/L。所得数据均用Beckman黄金系统软件分析处理 在此条件下，甘草酸迁移时间为4 min，氨荼碱为2．8min。
2．2 标准液的配制：精确称取甘草酸标准品100mg，加水溶解，用lOOml量瓶定容，作为贮备液 采甩倍比稀释法。使其稀释成1000，500．250，125．62．5mg/L5个浓度，各取5ml，加25g/l， 氨茶碱100μL ，混匀，作为待测样品。
2．3 内标的选择：考察了苦参碱、氧化苦参碱等不同生物碱作为内标的可能性，茂现氨茶碱在该环境中稳定，并且不干扰待测成分的色谱峰，重现性好，故选作检测甘草酸含量的内标
2．4 干扰试验：在本试验条件下．考查了临床上常用的36种药物和甘利欣注射液中其他成分可能会造成的干扰。结果表明-除法奠替丁外，其余药物对甘草酸和氨茶碱色谱峰无干扰。
2．5 标准曲线和线性范围：将2．2项下所述的5个不同浓度贮备渣，按2．1测定条件测定，每个浓度重复3次，甘草酸与氮茶碱浓度比见表1。 甘草酸浓度为横坐标，甘草酸与内标峰面积比为纵坐标，最s],-乘法线性回归 结果表明一甘草酸在62．5～1000mg/1 时，其线性关系良好，直线方程为Y = 486．417x+ 8．706， 0 9997。
2．6 精密度：将2．2项下所述的高、中、低3个不同浓度贮备灌，按2．1测定条件测定 每个浓度为3次，连续测定3d，计算日内、日同精密度，结果见表2。
2．7 重现性：取批号为990209样品6份，按样品测定方法操作、测定。6次测定结果表明，当甘草酸含量为500mg/L，氨茶碱为500mg/L时，甘草酸的迁移时同是4．85士O．934，氨茶碱是2．83士O．915。甘草酸的峰面积为3．16士0．041．氨茶碱为1．53士0．026，RSD均小于5 。
2．8 回收实验：精密称取甘草酸标准品，按制剂标准要求 ，配制成250，500和1000mg/L3种浓度．同法测定，计算其回收率为104．3，99．1和98. 6 。平均回收率为100．6％ ，RSD为3．1 。
2．9 最低检测限 当信噪比大于2时，甘草酸的最低检测限为lμg／m]。
2．10 样品测定：取江苏天晴制药 厂生产的4个不同批号甘利欣注射渍，每批抽硷6支，每支6复昔，用双蒸去离子水稀释，使其浓度为500mg/L，各取5rn]，加25g/L 氨茶碱100μL混匀 按照上述设定的工作条件，检测样品中甘草酸吉量。结果见表3
3 讨论
实验结果表明10mmol/L的磷酸缓冲液(pH7．0)中含12．5mmol/L。SDS的电沫电解渡分离效果良好，待测成分与内标分别在4．8和2．8rain出峰，峰形及分离度良好.干扰试验表明，临床常用的或可能会与甘草酸联合使用的36种药物中，除法奠替丁干扰甘草酸的色谱峰外，其余药品均无干扰。日内、日同RSD均在允许范围之内，最低检测限为lmg/L 上述结果表明该方法的重现性、精密度均杼合实验要求，具有简便、快速、灵敏、经济等优点另外，使用该方法测定了某药厂生产的4个批号甘草酸注射液中甘草酸古量，发现实测值与标示量的差别均小于士10%最近彭军等人比较了毛细管电豫法与高技液相色谱法测定甘草制品中甘草酸含量的差别 ]，发现毛细管电沫技术中的腔束电动毛细管色谱法与HPLC法所得结果极为近似，明显优于区带电泳法。这一发现与我们的实验结果基本是一致的．与其相比，我们建立的方法有二个优点。一是选用
内标法进行定量分析，使测定结果更为精确(r=O．9997，日内、日间RSD<5．0 )；另外，在上述分析条件下，被硷物质出峰快，分析时同明显缩短．
参考文献
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