高效液相色谱法测定心舒颗粒中丹参素钠含量

【摘要】  目的：建立一种测定心舒颗粒含量的方法。方法：以Shimpack CLCODS(5 μm,4.6 mm×150 mm)为分析柱，甲醇乙腈磷酸三乙胺水溶液(4：3：93)为流动相，检测波长281 nm，进样量10 μL。采用HPLC法测定丹参素钠的含量。结果：丹参素钠在0.26 μg-0.62 μg范围内，线性关系：Y=14372866X-137054.2(r=0.9998)，平均回收率为97.32%，RSD=1.66%(n=5)。结论：本法操作简便，结果可靠，重现性好，可作为该产品质量控制的方法。

【关键词】  心舒颗粒；丹参素钠/分离提取；色谱法，高压液相

      心舒颗粒由丹参、三七、绞股蓝等药材经科学方法提取制得的复方制剂。临床用于冠心病心绞痛、高脂血症等疾病的治疗。方中的丹参是君药之一，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的作用［1］。丹参素为丹参所含专属性成分，是一种水溶性酚酸，具有抗血小板聚集和解聚的作用［2］。采用高效液相色谱法测定该制剂的君药丹参中丹参素钠的含量作为定量指标，从而有效地控制该产品质量。

    1  实验材料

    1.1  仪器  日本岛津LC10ATVP液相色谱仪，中北色谱工作站，SPD10AVP检测器。

    1.2  试剂  甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水。其他均为分析纯。

    1.3  对照品  丹参素钠对照品由中国生物制品检定所提供(855200202含量测定用)。

    2  实验方法及结果

    2.1  色谱条件  色谱柱：Shimpack CLCODS(5 μm，4.6 mm×150 mm)；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测时间25 min；测定波长281 nm；流动相：甲醇乙腈磷酸三乙胺水溶液(4∶3∶93)，理论板数按丹参素钠峰计算应不低于6000。

    2.2  线性范围的考察  精密称取经五氧化二磷真空干燥24 h的丹参素钠对照品2.22 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含丹参素钠44.4 μg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述丹参素钠对照品溶液6 μL、8 μL、10 μL、12 μL、14 μL注入液相色谱仪中，记录色谱图，测定其峰面积，并以进样量(μg)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，进行回归，得回归方程：Y=1437286X-137054.2(r=0.9998)。

      试验结果表明，在拟定的色谱条件下，丹参素钠在0.26 μg-0.62 μg之间，进样量与峰面积线性关系良好。

    2.3  供试品溶液的制备  取样品(批号：20061105)数袋混匀，研细，取0.5 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密量取25 mL甲醇至瓶中，称定重量。分别超声提取20 min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液经微孔滤膜(0.45 μm)滤过，溶液置棕色瓶中作为供试品溶液。

2.4  精密度试验  精密吸取丹参素钠对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定峰面积，计算丹参素钠吸收峰面积，结果RSD＝0.4%，说明本方法精密度良好。

    2.5  重现性试验  取样品(批号20061120)数袋混匀，研细，取0.5 g，共计5次。按2.3项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μL，按前述液相色谱条件测定，记录色谱图，并计算含量，含量结果RSD＝2.32%，试验表明，该方法重现性较好。

    2.6  稳定性试验  取供试品溶液(批号:20061120 )与丹参素钠对照品溶液，按0 h、2 h、4 h、6 h、8 h时间间隔，分别进样10 μL，样品RSD为2.0%，对照品RSD＝0.36%。试验结果表明，供试品溶液待测组分在8h内化学性质稳定。

    2.7  加样回收率试验  精密量取丹参素钠对照品溶液(0.47 mg/mL)5 mL，5份，分别置50 mL具塞锥形瓶中，水浴上挥干甲醇。取已知含量的样品(批号:20061120)数袋混匀，研细，取0.25 g，5份，精密称定。分别置上述具塞锥形瓶中。精密加入甲醇25 mL，称定重量。按2.3项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μL，按前述液相色谱条件测定，记录色谱图，并计算含量，计算平均回收率为97.32%，RSD＝1.66%。结果表明本法具有良好的回收率，结果见表1。

    2.8  样品测定  按2.3项下方法制备3个批号6个表1  回收率试验结果 表2  样品中丹参素钠的含量测定

    批    号样品中丹参素钠的含量(mg/g)12200612051.821.801.810200612121.541.571.555200612231.691.621.655    　　根据以上各批测定的结果，暂定本品每克含丹参以丹参素钠(C9H10O5Na)计不得低于1.0 mg。

    3  小结

      本法采用甲醇为溶媒配制的对照品溶液，在12h内丹参素钠未见分解，且以此溶媒溶解样品，溶解性好。　　丹参素以丹参素钠的形式存在于中药内，本实验直接采用甲醇超声提取样品，方法简便易行，且加样回收率在99%以上，表明试验方法的稳定性、重现性良好。

【参考文献】
  ［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［M］.北京：化学工业出版社，2005：52.

  ［2］朱 亮，邵以德.合成消旋丹参素及其衍生物对血小板聚集和eAMP含量的影响［J］.上海医科大学学报，1985，12(6)：461.