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【摘要】 目的:建立测定参芪胶囊中有效成分含量的方法。方法:采用HPLC对参芪胶囊中天麻的含量进行测定。结果:天麻素在0.0832 μg-0.037512 μg之间具有良好的线性关系,平均回收率为100.5%,RSD=1.65%(n=5)。结论:该方法灵敏、重现性好,适用于参芪胶囊中天麻的含量测定。
【关键词】 天麻素/分离提取;色谱法,高压液相;人参;黄芪
参芪胶囊由人参、黄芪、天麻等11味药组成,具有补气养血,健脾益肾的功效,天麻作为主要药物之一,其活性成分为天麻素,由于本制剂含药味多,成分复杂,互相干扰大,因此通过试验,建立了高效液相色谱法测定参芪胶囊中天麻素的含量,经方法学考察证实该方法特异性高,回收率和精密度好。
1 实验材料
LC2010高效液相色谱仪,SPDM10Avp二极管阵列检测器,LC10ATvp高效液相色谱仪,SPD10Avp紫外检测器,CLASSVP工作站,N2000色谱工作站。天麻素对照品购自中国药品生物制品检定所,甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件[12] 色谱法:Aglient C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇0.1%磷酸溶液(5∶95);流速:1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长:220 nm;进样量20 μL。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取天麻素对照品适量,加乙腈水(3∶97)制成每1 mL含50 μg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备 取本品,研细,取约3.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%乙醇50 mL,称定重量,加热回流提取2 h,放冷再称定重量,用50%乙醇补足减失的重量,滤过,取续滤液5 mL,浓缩至干,残渣加乙腈水(3∶97)混合溶液溶解,转移至10 mL容量瓶中,并用乙腈水(3∶97)混合溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.4 线性关系考察 精密吸取天麻素对照品溶液2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL分别注入液相色谱仪,测定天麻素色谱峰面积。以天麻素的进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,得回归方程:Y=-16803.64286+1646178.384X(r=0.9996)。结果表明,天麻素在0.0832 μg-0.37512 μg之间具有良好的线性关系。
2.5 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液10 μL,重复进样6次,分别计算天麻素的质量分数,结果其RSD为1.08%。
2.6 稳定性试验 精密吸取对照品溶液10 μL,分别于0 h、2 h、4 h、24 h、36 h测定峰面积,计算得天麻素峰面积的RSD=1.80%,表明对照品天麻素在36 h内稳定。
2.7 重现性实验 取样品,精密称定5份,制备供试品溶液,进样测定计算天麻素的质量分数,其RSD=1.68%,平均含量为1.80 mg/g。
2.8 回收率实验 采用加样回收法。取样品5份,每份1 g,置具塞锥形瓶中,各精密加入天麻素对照品1 mg,制备供试品溶液,进样,测定。结果天麻素平均加样回收率为100.5%,RSD=1.65%。
2.9 样品测定 取3批参芪胶囊制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL,进样,测定,结果见表1。
表1 参芪胶囊中天麻的测定结果
批号天麻素(mg·g-1)平均含量0702011.760702022.011.800702031.63 根据结果,暂定本品以干燥品计,含天麻素含量不得少于1.6 mg/g。
3 小结
本实验曾选择流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(5∶95)溶液系统,结果不太理想,天麻素的出峰区间有干扰,峰形欠佳。而采用本实验的色谱条件即甲醇-0.1%磷酸溶液(5∶95),天麻素峰的分离得到明显的改善[34]。
【参考文献】
[1]卫生部药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2000:255.
[2]苗明三,李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京:人民卫生出版社,2003:80.
[3]王彦斌,聂凌云,罗兴平.天麻胶囊中天麻素含量测定方法的研究[J].中国现代中药,2006,13(12):8.
[4]向辽源,门 英,张 波,等.HPLC测定天麻胶囊中天麻素含量[J].中国现代中药,2006,13(12):8.